稳转细胞系建立实验_蚂蚁淘，【正品极速】生物医学科研用品轻松购|ebiomall -蚂蚁淘商城

商品列表技术文章相关问答

当前位置： > 首页 > 技术文章 >

稳转细胞系建立实验

来自 : mayitao

服务名称：稳转细胞系建立实验服务
提供商：上海经科化学科技有限公司
规格：个
稳转细胞系建立实验服务

一、实验简介
细胞转染是指将外源分子如DNA、RNA等导入真核细胞的技术。主要包括：电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、病毒介导的转染等，理想的转染方法是具有高转染效率、对细胞毒性作用小等。其中脂质体转染是常用的简便转染方法。
脂质体（liposome）转染方法的原理在于，阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用将DNA分子包裹，形成DNA-脂复合体，被表面带负电荷的细胞膜吸附。再通过膜的融合或细胞的内吞作用，偶尔通过直接渗透作用，将DNA转运至细胞内，形成包涵体或进入溶酶体。当DNA从包涵体内释放后，进入细胞质，再进一步进入核内实现转录、表达。
细胞感染是指通过病毒载体将外源分子导入真核细胞。因病毒可以通过自身的侵袭作用进入宿主细胞后，可以利用细胞中的物质和能量以及复制、转录和转译的能力，按照自身核酸所包含的遗传信息产生和它一样的新一代病毒。利用这种特性，去掉病毒的致毒基因并将外源基因片段插入制成病毒载体，进而将目的片段转入受体细胞，使目的基因可以表达，甚至将基因遗传给后代稳定的表达。目前常见用于转染的病毒有，慢病毒，逆转录病毒，腺病毒等。

二、siRNA/shRNA/miRNA/DNA转染细胞实验步骤（以6孔板为例）
1 转染前一天接种细胞于6孔板，5×10⁴每孔，第二天转染时细胞汇合度达到60%-70%每孔。
2 转染前半小时将完全培养基换无血清培养基1.9ml。
3 A液：RNA 100 pmol/DNA2μg （根据核酸类型不同，用量不同）加入50ulOpti-MEM无血清培养基，轻轻混匀，室温静置5min。
4 B液：脂质体使用前轻轻混匀，脂质体5ul 加入50ulOpti-MEM无血清培养基，轻轻混匀，室温静置5min。
5 B液加入到A液中，用枪轻轻混匀，室温静止20min。
6 将混合液均匀分散慢慢滴加到6孔板细胞中，边滴加边前后左右十字交叉轻轻摇晃。
7 孵箱37℃培养4~6h，然后将无血清培养基换成完全培养基继续培养。
8 mRNA 水平的检测：在转染后24-48h后，用Real-timePCR的方法在mRNA水平进行检测。
9 蛋白水平的检测：在转染后48-72h后，用Western-blot或免疫组化的方法在蛋白水平进行检测。

三、细胞感染实验步骤（以慢病毒感染为例）
1、转染前一天，取2-3×10⁵cells/well的细胞接种在6孔板上，培养24h后将原有培养基弃去，加入2mL的细胞完全培养基。
2、置于CO₂浓度为5%的培养箱中于37℃培养至细胞汇合达到40-60%。
3、细胞换液，将病毒液与终浓度5μg/mlpolybrene加入新鲜培养基中。8-12h后观察细胞状态，若细胞状态无明显病变，继续培养，24h后更换新鲜培养基。
4、根据公式计算病毒用量（细胞数×MOI值/病毒原液滴度）×10³=病毒用量（μl）
5、72-96h察荧光表达情况，对生长代谢缓慢的细胞，可适当延长观察时间，并及时换液和传代维持细胞生长状态。

注意：
感染细胞最佳MOI的测定：MOI（感染复数）是指每个细胞感染的病毒数。通常MOI高，病毒整合到染色体的数量以及目的蛋白的表达量越高。对于分裂活跃的细胞，例如HeLa、293细胞，MOI=1-3时，80%以上细胞均表达目的基因。而对于非活跃的细胞，如原代细胞，感染效率较低，需要进行MOI浓度摸索实验，选择合适的MOI后再进行后续实验。

本公司还提供

“病理学”、“分子生物学”、“细胞生物学”、“图像分析”

“免疫学”、“动物实验”、“蛋白质相关”、

等各项服务：

micro-CT实验服务
PET实验服务
PET-CT实验服务
活体成像实验服务
长毒实验服务
急毒实验服务
溶血实验服务
液相（HPLC）方法学开发实验服务
液相（HPLC）检测实验服务
液质方法学开发实验服务
液质（LC-MS）检测实验服务
I型糖尿病模型实验服务
II型糖尿病模型实验服务
动脉粥样硬化（As）动物模型实验服务
裸鼠成瘤实验服务
动物模型实验服务
肺纤维化模型实验服务
肝纤维化模型实验服务
肝硬化模型实验服务
高脂血症动物模型实验服务
急性肺损伤模型实验服务
急性肝损伤模型实验服务
老年痴呆AD小鼠实验服务
裸鼠皮下移植瘤实验服务
裸鼠血液肺转移瘤实验服务
mPDX实验服务
脑缺血再灌注动物模型实验服务
鼠源皮下移植瘤实验服务
鼠源血液肺转移瘤实验服务
非酒精性脂肪肝模型实验服务
细胞购买（冻存）实验服务
细胞购买（复苏）实验服务
动物购买实验服务
动物取材实验服务
饲料定制实验服务
细胞购买（代购）实验服务
其他动物实验服务
细胞培养实验服务
细胞爬片实验服务
成骨诱导实验服务
成脂诱导实验服务
活细胞内钙离子检测实验服务
平板克隆形成实验服务
成管实验服务
双荧光素酶报告基因实验服务
细胞划痕实验服务
Transwell迁移实验服务
Transwell侵袭实验服务
MTT实验服务
CCK8实验服务
细胞黏附实验服务
细胞BRDU实验服务
细胞EDU实验服务
细胞转染实验服务
RNA（siRNA,miRNA,shRNA）实验服务
质粒转染实验服务
RNA转染实验服务
病毒感染/病毒转染实验服务
稳转细胞系建立实验服务
流式-JC-1（培养细胞）实验服务
流式-ROS（培养细胞）实验服务
流式摄取实验服务
PI染色实验服务
ROS活性氧检测实验服务
流式细胞周期实验服务
流式细胞凋亡实验服务
流式表抗-单标实验服务
流式表抗-双标实验服务
流式表抗-三标实验服务
细胞浸袭实验服务
细胞生长曲线绘制实验服务
课题qPCR检测实验服务
课题WB检测实验服务
脱钙（快脱）实验服务
脱钙（慢脱）实验服务
植物标本软化（普通根、茎）实验服务
植物标本软化（种子、硬枝）实验服务
组织石蜡包埋实验服务
细胞石蜡包埋实验服务
组织芯片定位实验服务
组织芯片蜡块制作实验服务
琼脂包埋实验服务
特殊包埋实验服务
石蜡切片实验服务
组织芯片切片实验服务
冰冻切片实验服务
HE染色实验服务
番红-固绿染色（植物）实验服务
番红-固绿染色（软骨）实验服务
masson染色实验服务
天狼猩红染色实验服务
PAS糖原染色实验服务
阿利新蓝（AB）染色实验服务
AB-PAS染色实验服务
油红O（切片）染色实验服务
瑞士吉姆萨染色实验服务
甲苯胺蓝染色实验服务
尼氏染色实验服务
肥大细胞染色实验服务
苯胺蓝染色实验服务
LFB髓鞘染色实验服务
普鲁士蓝染色实验服务
EVG染色实验服务
苦未酸品红VG染色实验服务
Vonkossa染色实验服务
茜素红染色实验服务
抗酸染色实验服务
富尔根染色实验服务
间苯二酚碱性品红染色实验服务
刚果红染色实验服务
快速革兰氏染色实验服务
亚甲基蓝染色实验服务
黑色素染色实验服务
碘-碘化钾染色实验服务
Goldner三色法染色实验服务
PAS-萘酚磺S染色实验服务
改良苯酚品红染色实验服务
网状纤维染色实验服务
Trap染色实验服务
β-半乳糖苷酶染色实验服务
油红O（大体）染色实验服务
镀银染色实验服务
PASM六胺银染色实验服务
TTC染色实验服务
ATP染色实验服务
ALP碱性磷酸酶染色实验服务
movat五色染色实验服务
锇酸染色实验服务
高尔基染色（含多层染色）实验服务
维多利亚兰染色实验服务
树脂包埋（透射电镜）实验服务
半薄切片实验服务
超薄切片实验服务
负染实验服务
透射电镜（制片/拍照）实验服务
透射电镜全套（包埋+制片+拍照）实验服务
扫描电镜实验服务
扫描电镜观察实验服务
脱水干燥喷金实验服务
电镜分析实验服务
免疫荧光（单标）实验服务
免疫荧光（双标）实验服务
免疫荧光（单标，芯片）实验服务
免疫荧光（双标，芯片）实验服务
尼罗红染色（含荧光拍照）实验服务
免疫组化/IHC实验服务
免疫组化（芯片）实验服务
Tunel（白光）检测实验服务
Tunel（荧光）检测实验服务
原位杂交（DAB显色、NBT显色）实验服务
原位杂交（单标）实验服务
原位杂交（双标）实验服务
原位杂交（三标）实验服务
原位杂交白光实验服务
活细胞成像实验服务
激光共聚焦拍照实验服务
3D成像实验服务
拍照（白光）实验服务
芯片拍照（白光）实验服务
病理描述实验服务
形态分析（测量类）实验服务
组化分析实验服务
切片扫描+分析（组化）实验服务
普通切片扫描（白光）实验服务
普通切片扫描（荧光单标）实验服务
普通切片扫描（荧光双标）实验服务
组织芯片扫描（白光）实验服务
组织芯片扫描（荧光单标）实验服务
组织芯片扫描（荧光双标）实验服务
多层扫描，精细扫描（放大1000倍）实验服务
组织芯片扫描+分析（组化）实验服务
多层扫描（高尔基染色片）实验服务
多层扫描（油红O染色）实验服务
WB（普通蛋白）实验服务
WB（磷酸化蛋白）实验服务
WB（核蛋白、线粒体蛋白、膜蛋白）实验服务
IP实验服务
COIP实验服务
ELISA检测实验服务
生化检测实验服务
血常规（动物外周血）检测实验服务
化学发光实验服务
组织样本匀浆实验服务
引物合成实验服务
Real-timePCR检测实验服务
RT-PCR(电泳）实验服务
DNA/质粒实验服务
甲基化检测MSP实验服务
甲基化检测BSP实验服务
micRNA检测实验服务
质粒构建实验服务
质粒扩增实验服务
质粒提取实验服务
药效评价实验服务
IVC大鼠饲养实验服务
代谢笼实验服务
IVC小鼠饲养实验服务
排泄实验服务
普通小鼠饲养实验服务
普通大鼠饲养实验服务
高脂小鼠饲养实验服务
高脂大鼠饲养实验服务

实验要求、样本情况、收费标准、操作流程等详情请咨询我司客服！