DNA荧光染色的样品制备实验
试剂、试剂盒 | PBS 仪器、耗材 | DNA荧光染料流式细胞仪 实验步骤 | DNA是细胞内含量比较恒定的参量,随着细胞增殖周期的各时相而发生变化。荧光染料(如PI)可选择性地定量嵌入核酸(DNA/RNA)的双螺旋碱基之间,与细胞特异性结合,DNA含量与荧光染料的结合量成正比,因此通过测定荧光强度可获知细胞的增殖情况。 1.将固定过的细胞离心(500~1000rpm,5min)弃上清液,再用PBS洗涤2次。 2.用PBS调整细胞浓度,每份为1×106个细胞/100μl。 3.加入1000μlDNA荧光染料(通常用Coulter公司提供的DNA染色试剂盒),室温下避光染色15min。 4.上流式细胞仪检测。 样品的制备可分析细胞周期各时相的百分比,同时可粗略观察有无凋亡细胞现象,如果用对照液(鸡红细胞)作参照标准,可进行细胞DNA倍体分析,通过DNA指数(DNAindex,DI)衡量DNA的相对含量,DI可用下式计算: DI=样品G0/G1期的均值/正常二倍体细胞G0/G1期均值 |
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发布于 : 2021-09-02
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