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hela细胞,消化收集后保存在-80度,今天拿来裂解,发现裂解后溶液粘稠,根本没有办法取上清,请教大家。
裂解液:PBS100ml
NP-40 1ml
脱氧胆酸钠500mg
SDS 100mg
4度保存,临用加入1%PMSF储液(10mM/L)
裂解方案:3*106个细胞,加入50ul裂解液,吹打均匀,冰水中孵30分钟;取出,用1ml蓝枪头抽5次,12000rpm,30min,4度离心。
裂解现象: 离心后EP管底有薄层白色物质,但整个液体非常粘稠,用移液枪一吸就会整体被吸起来,无法分离出上清。细胞裂解的资料都说,离心后取上清,保存起来备用,到底问题出在那里呢?
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裂解液:PBS100ml
NP-40 1ml
脱氧胆酸钠500mg
SDS 100mg
4度保存,临用加入1%PMSF储液(10mM/L)
裂解方案:3*106个细胞,加入50ul裂解液,吹打均匀,冰水中孵30分钟;取出,用1ml蓝枪头抽5次,12000rpm,30min,4度离心。
裂解现象: 离心后EP管底有薄层白色物质,但整个液体非常粘稠,用移液枪一吸就会整体被吸起来,无法分离出上清。细胞裂解的资料都说,离心后取上清,保存起来备用,到底问题出在那里呢?
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