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CN107385014A_一种直接定量检测循环miRNA的RT‑qPCR方法在审
专利基本信息
| 申请号 | CN201710442989.5 | 申请日 | 2017-06-13 |
| 公开（公告）号 | CN107385014A | 公开（公告）日 | 2017-11-24 |
| 申请公布号 | CN107385014A | 申请公布日 | 2017-11-24 |
| 分类号 | C12Q1/68(2006.01)I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 |
| 发明人 | 苟德明;牛燕琴;康康 | 申请（专利权）人 | |
| 代理机构 | 广州番禺容大专利代理事务所（普通合伙） | 代理人 | 刘新年 |
| 地址 | 518060 广东省深圳市南山区南海大道3688号粤海门广场A207 | ||
| 摘要 | 本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种不需提取核酸，直接检测血清或血浆中循环microRNA(miRNA)的实时荧光定量RT‑qPCR方法。所述方法包括：S1：裂解血清或血浆中的外泌体及miRNA蛋白复合体，离心后得到循环miRNA粗提物；S2：miRNA加尾及逆转录；S3：RT‑qPCR定量检测。本发明miRNA直接荧光定量RT‑qPCR扩增方法[Direct S‑Poly(T)Plus,简称DSPP]中，不需要提取核酸，且miRNA的Poly(A)加尾和逆转录将在一个反应体系中同步完成，操作简便，缩短时间，可在95分钟内完成cDNA的制备。该技术体系灵敏度与stem‑loop方法相比提高数十甚至上百倍，建立了一种非常简便、灵敏、高效、快捷、廉价的miRNA检测的技术体系。该技术体系尤其适合于临床应用推广及其从miRNA丰度较低的生物体液样本中检测miRNA。 | ||
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