DiD Labeled Fluorescent Control Liposomes for Clophosome® -A (Anionic)
Thefluorescent control liposomescontainthe lipophilic dye DiD incorporated in the bilayers. It has comparable physical and chemical attributes as for the Clophosome® except noactive is encapsulated inside. It is used for tracking the cellular uptake of the liposomes by common methods like confocal, FACS, etc.
The far-red fluorescent, lipophilic carbocyanineDiDis a longer-wavelength DiI analog. It is an oil at room temperature and weakly fluorescent in water but highly fluorescent and quite photostable when incorporated into membranes. It has an extremely high extinction coefficient and short excited-state lifetimes (~1 nanosecond) in lipid environments.
Specifications
Lipid composition:phosphatidylcholine,phosphatidylglycerol andcholesterol
Dye: 0.15 mM (0.14mg/mL)
Stability: 6 months for unopened vials
Storage: 2-8 ºC
'DiD'; DiIC18(5) oil (1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-Tetramethylindodicarbocyanine Perchlorate)(Invitrogen D-307)
Ex/Em:644/665 nm
CAS Number:127274-91-3
FormuMax科学公司位于加利福尼亚州北部硅谷的中心地带,是一家专业的药品配送公司,致力于满足医药/生物技术、化妆品和保健工业的配方开发外包的日益增长的需求。经营理念是成为**的伙伴,作为药物交付的***,特别是在制定具有挑战性的化合物脂质体和其他新的纳米技术。FormuMax拥有一支技术团队,在药物递送领域拥有***的专业知识,特别关注脂质体和其他基于脂质的技术。它们目前提供基础研究,配方可行性,定制配方准备,配方表征和分析科学的合同服务。FormuMax是**家提供大量预成型脂质体试剂的在线商店。已经成功地为来自世界各地的大学实验室、研究中心和各种行业的客户提供了服务和/或产品。
FormuMax供应主要产品:
Clophosome-氯膦酸盐脂质体
FormuMax提供两种预埋有氯磷酸盐分子的中性脂质体产品,该产品单次静脉或腹腔注射后可在脾脏经巨噬细胞清除率可达80-90%,并具有高度活性、稳定的理化性质(长期冰箱存放后仍保持均一性及悬浮特性),粘滞度低使用简便,适用于静脉、腹腔、皮下、鼻腔、气管等多种方式给药。
Doxoves-盐酸多柔比星脂质体
FormuMax可提供脂质定制的盐酸多柔比星脂质体(定制内容为脂质成分及脂质体大小)。FormuMax提供的产品为Doxoves,具有高度的产品稳定性和一致性,紧密的粒径分布和高效的药物包埋效率(高达4.0mg/mL(40mMlipid)的包埋药物浓度)。Doxoves系列产品在产品特性、稳定性及药代动力学特性上可媲美商业产品Doxil。
DrugLoadedliposomes
FormuMax提供多款包埋活性药物的脂质体产品,包括DoxorubicinHCl(含2.0mg/mL及4.0mg/mL两种浓度),IrinotecanHCl(2.0mg/mL),TopotecanHCl(2.0mg/mL),产品线仍在持续更新中。
预制脂质体
FormuMax供应的预制脂质体产品囊括多种通用的脂质体类型,使用世界*的优质脂类原料。该系列产品易于使用,稳定性、可靠性及可重复性高,节省时间和成本,并可为研究人员提供定制脂质体服务。目前FormuMax提供聚乙二醇化/非聚乙二醇化的常用脂质体,以及含浓度梯度Ammonium的脂质体
阳离子脂质体
FormuMax供应一系列的阳离子脂质体,用于需带正电荷的脂质体或细胞转染质粒DNA、反义/干扰RNA等。
荧光脂质体
FormuMax供应预制荧光标记的脂质体,包括常规荧光脂质体、生物素化的荧光脂质体以及Avdinized化的荧光脂质体,另外还提供客户定制的荧光脂质体(脂类及染料可选)。
脂质体制备薄膜
FormuMax供应一系列不同规格的聚碳酸酯薄膜,用于脂质体挤出制备。
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各位版友求助,
我使用Hek293构建转染模型,瞬转5质粒,用lipo2000做转染体系。
转染48h,发现荧光较强的细胞都在爬片的边缘,比例十分少。是因为我添加试剂的手法不对吗。
同时也发现加入转染体系后细胞状态特别差。想问一下用lipo2000时可以用无双抗的10%FBSDMEM吗。我转染前6h现在用的是纯DMEM,不含FBS。
请各位大神帮忙
我刚开始做转染,悬浮细胞,分别做过表达和敲减,看了很多文献,大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr,wb,cck8,凋亡,细胞周期;还是说这次转染只做pcr或wb,再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前,转染一次做一次?我养的是悬浮细胞,转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗?跪谢解答!
其次要看下你选择单位的规模如何,上海这边的,你可以看下基尔顿生物,原代细胞培养,动物造模,整体课题外包。
实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒,转染细胞没问题。
我觉得只要是注意以下2点就可以了:
1,注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染,收集菌体沉淀时防止菌液散落,经常用75%的乙醇擦拭手套。
2,最后洗脱时最好使用无内毒素的水,我们是用注射用水的。
无论是小提还是大提我们都是用的日常型的,并没有刻意用转染级的,因为转染量大,去内毒素的操作太麻烦,损失太大。
悬浮细胞的转染方法:(以下内容转自生物帮资讯)
DXY721认为:
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大,主要差别在于转染后的筛选,当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单,问题是能不能转的进去的,转染率能有多少,转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染,说明书上都有具体的操作过程,将脂质体和目的基因按比例混合,然后加到细胞悬液里就OK了,说的简单,实际上还是有一些细节要注意的,比如脂质体和目的基因混合的比例,转染的细胞数,细胞的代数,细胞的状态,有的还要求在转染的前一天传代一次,不过不要怕,这些在脂质体说明书上都有明确的说明,按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为:
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法,目前为止,悬浮细胞转染的最好方法还是电转,我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的,使用条件是电压250V,电容975uF,效果不错,不妨一用。
GFP发出绿色荧光的原理是Ca离子进入GFP的beta-barrel结构中引起的特定能级,因此只要这个结构仍然保持着,就可以发出荧光。
由于GFP的beta-barrel结构非常稳定,一些版本的GFP蛋白(如EGFP)甚至能抵抗94C的高温几分钟而不完全变性,因此想在溶液状态下去掉GFP的荧光是很难的,一般需要用光漂白法。
基于其非常稳定的结构,即便细胞被固定了,仍然会有一部分的GFP蛋白保持其构象而发出荧光。此时荧光可能较弱。在荧光显微镜下是有可能看得到的。
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