【请教】请问抗原制备至这一步可以对动物免疫了吗?
2021-07-30
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小善人
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顶一下。别沉下去,着急呢!
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oceansummer
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建议把合成后的交联物冷冻干燥进行动物免疫。透析后的产物里面小分子的NP应该都透析掉了,二甲亚砜和甲醛应该也应该可以透析掉,你的合成反应中控制好BSA和NP的反应比例,让NP过量的话,最后的反应物中BSA应该也会很少。如果你觉得自己的抗原不纯,可以通过凝胶电泳看看条带是否很多。反正是做多抗,抗原也不需要太纯,当然越纯越好了。我在免疫的时候,是把自己合成的抗原冻干了,然后称量,家兔免疫剂量在2mg左右/只,另外半抗原的免疫,初免和次免最好间隔时间长些,初免用完全佐剂,次免用不完全佐剂。加强一次后可以试血,如果有抗半抗原的抗体,那就证明你的完全抗原没有问题!
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小善人
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感谢oceansummer,我查文献也说冻干后再称量免疫的,但我根据反应前的BSA的浓度及体积和透析完后的总体积粗略算出了透析液中BSA浓度,约为8mg/ml,现准备对其用PBS进行等体积稀释,然后乳化再免疫,不知行不行。
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