质粒的转化及转化子的鉴定实验一电转化法
实验方法原理 | 电转化法:外加于细胞膜上的电场造成细胞膜的不稳定,形成电穿孔,不仅有利于离子和水进入细菌细胞,也有利于孔DNA等大分子进入。同时DNA在电场中形成的极性对于它运输进细胞也是非常重要的。 | ||||||
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实验材料 | 外源片段与载体的连接产物大肠杆菌感受态细胞 试剂、试剂盒 | X-galAmpLA培养基水抗生素 仪器、耗材 | 培养皿灭菌锅离心管摇床 实验步骤 | 1. lml X-gal (20mg/ml),25 ml Amp(100mg/ml),250 ml制备选择性培养基平板:在融化的250ml LA培养基中250 mIPTG (200mg/ml),混匀后倒入灭菌培养皿中; 2. 取出制备好的感受态细胞,放在冰上融化; 3. 连接产物,用移液器轻轻吸打均匀,置冰上;每管感受态细胞加入1μl 4. 电转化仪选择1800V作为输出电压; 5. 将要转化的混合物加入预冷的1 mm的电转化杯中,立即按下按纽电击; 6. 立即加1ml SOC培养基到转化杯中重悬细胞; 7. 将细胞转入合适的培养管中37℃培养1小时; 8. 吸取合适体积的菌液涂布已倒好的选择培养基平板; 9. 37℃培养过夜,观察结果。 |
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发布于 : 2021-08-10
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