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原代细胞和细胞系哪个认可度更高
细胞系是不断生长,分化的细胞群,因其经过遗传改造,致使其具有无限增长的潜能.体外生长的细胞系用于医疗或科研.实际上,连续细胞系可以用大量次培养基

帮同学问：最近要筛选一个人肺癌细胞稳定转染株，用什么方法比较好呢？目的细胞是人肺癌细胞，在其他地方看到有的用质粒，有的用慢病毒进行稳定株筛选，两种方法有什么区别呢，具体操作是什么呢？望有大神告知

直接用dmem就可以的吧，6孔板每孔加多少培养基比较合适呢？没做过共培养比较忐忑，各位大神有什么经验可以分享一下吗

一、原代细胞与细胞系有什么区别？

根据传统定义，自组织第一次收获和接种的细胞被称为原代细胞[Freshney,R.I.(1987).CultureofAnimalCells.AManualofBasicTechnique.(NewYork,AlanR.Liss,Inc.)].这类细胞直接从组织分离，生命周期有限，经数次传代后会逐渐停止生长。原代细胞在有限的生命周期内需掌握好细胞的最大生长空间，以保持细胞群中基因型和表型的一致性。
细胞系是不断生长、分化的细胞群，因其经过遗传改造，致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细胞系用于医疗或科研。
但实际上，经过长时间、连续的传代培养后，细胞系随着代数的增加，细胞的基因型和表型都有可能发生改变。
需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群，除非细胞经过了遗传改造。
二、倍增和代数有什么区别？

倍增是培养物中细胞总数的翻倍，通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出，传代培养过程的次数，传代培养的目的，是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。
三、接收到的冻存细胞该如何处理？

收到包装箱后，立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存。此过程尽量快，以避免升温。不要将细胞储存在-80℃，这样会对细胞造成不可挽回的伤害。

四、有多少经验才能开始正常人类细胞培养？

推荐有经验者在无菌环境下用洁净操作台工作，如果有细胞系培养经验的话，对原代细胞的培养也是很有益处的。如果你是细胞培养的初学者或打算建立细胞培养实验室，我们会为你提供帮助。请联系我们的细胞培养专家（裕恒丰科技有限公司）。
五、冻存的细胞该如何开始培养？

(1)将一管细胞从液氮罐中取出，注意保护手和眼睛。

(2)将冻存管快速的放入37℃水浴中，轻轻握住并旋转，直到管内物体完全融化。

(3)将冻存管立即从水浴中拿出，擦干，转入无菌环境。

(4)用70％的酒精冲洗冻存管，然后擦去多余酒精。

(5)打开盖子，注意手指不要碰到里面的螺纹（注意，由于冻存管有负压，开盖时可能会有少量溢出，这是正常现象）。

(6)用多聚赖氨酸（或参照说明书）包被培养瓶。多数细胞推荐的接种密度为每平方厘米5000个细胞。

(7)盖好培养瓶的盖子，轻轻摇晃培养瓶以使细胞分布均匀。若需要气体交换可打开盖子。

(8)将培养瓶放入培养箱中（37℃，5%CO2，95%空气）

(9)放入培养箱后第6-16小时更换一次培养基，以去除残留的二甲基亚枫和未贴壁的细胞。

六、当我第一次复苏正常人类细胞时，是否需要先离心细胞以去除二甲基亚枫吗？

第一次复苏正常人类冻存细胞时，我们不推荐离心去除二甲基亚枫。与残留的二甲基亚枫相比，离心过程对细胞的伤害更大，尤其是不适当的高速离心时。我们的经验是：如果二甲基亚枫的浓度很低，细胞不会受毒害。如果你将1ml细胞放入含15ml培养基的T-75培养瓶中，二甲基亚枫的浓度将小于0.67％，没有发现负面影响。实际上，如果细胞的接种密度为每平方厘米5000-10000个，二甲基亚枫的浓度很低。

七、细胞培养过程中，多久更换一次培养基？

这取决于细胞生长的速度。一般而言2-3天更换一次培养基，许多细胞培养实验室通常在周一，周三，周五更换培养基。
注意：冻存细胞复苏后，在6-16小时内更换培养基，以去除残留的二甲基亚枫和死亡的细胞。
八、我能扩增培养和再次冻存Sciencell的正常人类细胞吗？

这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞，神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞，不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等，可以扩增培养和再次冻存。然而，需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。如果你想要再次冻存细胞，请亲自咨询我们的技术支持并使用ScienCell无血清细胞冻存液（SF-CFM）和特定的无血清培养基，以获得最佳冻存效果。
九、我能长时间的冷冻保存ScienCell的原代细胞培养基吗？

我们不推荐冷冻保存培养基，高营养的培养基经过冷冻和复温后，可能导致培养基成分的不可逆降解，从而影响细胞的生长。
十、培养瓶中应该加入多少体积的培养基？

我们推荐的用量为：T-25培养瓶5ml，T-75培养瓶15ml，T-150培养瓶30ml。文章来源北京裕恒丰科技有限公司官方微信

之前一直做的是四氯化碳引起的小鼠肝组织急性损伤石蜡切片，买的是50t的试剂盒，做了四组重复，中间有一组结果较不好，又买了20t的试剂盒做重复，但是再也做不出来，后面换了DAB，结果还是不理想，DAB显色已经延长至8个小时，才有细微的显色，所有实验条件跟之前保持一样！求大神

干细胞的作用是什么？

可以。常用脂质体转染法。

脂质体是磷脂分散在水中时形成的脂质双分子层，又称为人工生物膜。
阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用将DNA分子包裹入内，形成DNA一脂复合体，也能被表面带负电荷的细胞膜吸附，再通过膜的融合或细胞的内吞作用，偶尔也通过直接渗透作用，DNA传递进入细胞，形成包涵体或进入溶酶体 其中一小部分DNA能从包涵体内释放，并进入细胞质中，再进一步进入核内转录、表达。

经战友同意，将与交流的内容贴出。

您好，
看到您在论坛中的留言，有几个问题想请教一下。
1、一般情况下，反应器中的产量会比摇瓶中的产量提高多少？
2、在培养基优化过程中，一般会有怎样的指导原则？（我在优化培养基时，随意性很大没有明确目标）
3、关于大豆蛋白胨水解多肽在以后的工艺开发中会不会被淘汰掉（近10年）？
4、目前国内的抗体表达水平是多少？我们明年的任务是4G/L，不知道压力是不是很大。（今年是3g/l左右）
期待您的解答……
谢谢！

配缓冲液的时候颜色总是红色，没有变蓝，而且缓冲液加到孔里后总是往上跑，电级没有反。

稳定转染的细胞株，就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。

我转的是7901、7901/DDP两种细胞，前者7901细胞很容易就转上，并且转后，状态良好，可是7901/DDP一转就死，我用的是吉玛慢病毒，转24小时后换液，刚开始一两天，没有异常，但后来细胞慢慢就死了，并且不是漂浮的，很多是贴着壁死，像是瓦解了一样

这是未转时细胞的样子

这是细胞转后，死亡的样子

并且即使是有些细胞未死，细胞后来也变得很脏，感觉有很破碎的细胞碎片

本人实验小白，**园子里大神指点，急，实在不知道怎么回事

HAC15细胞转染，目前用的lip3000、lip2000都用过，不知道是试剂剂量使用问题，还是购买试剂问题，荧光显微镜一个视野下好的有几个荧光，有得没荧光，没荧光，没荧光，求HAC15细胞转染用什么转染试剂转染效率高！！！