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三色抗体命名为A、B、C同型对照(阴性对照)管:A同型+B同型+C同型单阳性对照A检测管:A+B同型+C同型B检测管:B+A同型+C同型C检测管:C+A同型+B同型不存在荧光重叠的两个抗体不需要调节补偿。样本为PBMC,想用三色标记Treg细胞,分别为CD4-PECY,CD25-Fitc,Foxp3-PE,想知道如何设置荧光补偿,用的是BD的流式仪,1、是设置阴性管一个,单阳性管每种一个,样品管一个么?荧光素强度依次为PE, PECY5 APC FITC, PE最强,FITC最弱。 所以,建议抗体组合为:Foxp3-PE,CD4-FITC,CD25-PECy5.5或者CD25-APC。同时购买三个相应的同型对照抗体。样品管设置如下:1. cell + FITC-isotype + Pecy5.5( or APC)-isotype + PE-isotype2. Cell + FITC-isotype + CD25-mAb + PE-isotype3. Cell + PE-mAb + FITC-isotype + Pecy5.5( or APC)-isotype4. Cell + CD4-FITC + Foxp3-PE + CD25 -PECy5.5( or APC)。 [这一管的数据可以拿来分析用]。在充分了解调整电压和补偿原理的基础上,也可以做一些简化。如果不太懂,就按照这个来。其中Foxp3的抗体和同型对照抗体都是在固定破膜以后再加,不是与CD4或者CD25同时加。
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