【求助】问下前辈关于elisa酶联诊断定性的问题

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2021-08-03

问题描述：

正在酶联反应吸附试验的理论补充阶段，但是有一个问题一直迷惑不解，在许多论文上也没有指出来。在酶联反应最后的定性阶段，OA值大于cut-off值被定为阳性，小于cut-off值被定为阴性。实验中有阴性、阳性、空白对照，从理论上来讲，加入的酶标抗体、显色剂等现场加入的试剂间的差异性即使存在，也会通过一系列的对照发现问题，但是如果是酶标孔上的一抗出现问题，例如在保存过程中某些孔中的包被抗原活性受到影响或是在包被过程中受到影响，从而影响了和检测物与二抗的结合，这个问题能通过实验过程检查出来吗？能通过哪些方式检查？酶标仪能分析出来吗？

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sunveela

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还是说也被判断为阴性？

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ashafriend

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展开引用sunveela正在酶联反应吸附试验的理论补充阶段，但是有一个问题一直迷惑不解，在许多论文上也没有指出来。在酶联反应最后的定性阶段，OA值大于cut-off值被定为阳性，小于cut-off值被定为阴性。实验中有阴性、阳性、空白对照，从理论上来讲，加入的酶标抗体、显色剂等现场加入的试剂间的差异性即使存在，也会通过一系列的对照发现问题，但是如果是酶标孔上的一抗出现问题，例如在保存过程中某些孔中的包被抗原活性受到影响或是在包被过程中受到影响，从而影响了和检测物与二抗的结合，这个问题能通过实验过程检查出来吗？能通过哪些方式检查？酶标仪能分析出来吗？......如果一抗变质导致是有阴阳性的区别，用WB再做一遍比对一下就可以了如果只是结果高低的变化，那一般是工艺的问题或者是酶标板质量的问题，能不能鉴别的出就看你的实力了。工艺问题的话就变参数呗，酶标板的话找个好的作对照就能发现问题了。需要注意的是抗原跟不同东西结合活性肯定有区别，多做几种抗体，如果结果不相同，那恭喜你，可能是抗原在做的时候某个位点没做好。一般重组的抗原多少都会有这个毛病。如果是买的成品试剂盒，那就很难找原因了，毕竟人家的工艺都固定了，你也改不了。酶标仪就只是读数的，跟用眼看没啥本质区别。

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limichuan

用户

展开引用sunveela正在酶联反应吸附试验的理论补充阶段，但是有一个问题一直迷惑不解，在许多论文上也没有指出来。在酶联反应最后的定性阶段，OA值大于cut-off值被定为阳性，小于cut-off值被定为阴性。实验中有阴性、阳性、空白对照，从理论上来讲，加入的酶标抗体、显色剂等现场加入的试剂间的差异性即使存在，也会通过一系列的对照发现问题，但是如果是酶标孔上的一抗出现问题，例如在保存过程中某些孔中的包被抗原活性受到影响或是在包被过程中受到影响，从而影响了和检测物与二抗的结合，这个问题能通过实验过程检查出来吗？能通过哪些方式检查？酶标仪能分析出来吗？......很高兴看到有人保持着怀疑态度看问题，你说的这个问题确实存在，也确实发生，对于终端用户来讲你想分析出来那确实很困难，毕竟这属于产品问题了。但是你可以通过某些经验来判断，比如你测的样本理论都是阳性，但结果有阴性出现，那是不是要分析原因呢。但是大多时候我们是没有办法的。当然你也不要怕，毕竟这是小概率事件，首先厂家有自己的质量体系保证，你做实验的时候质控都会有，阴性阳性对照都会有，实在不行你再做复孔。如果还出现你所担心的问题，那就只能说哥们，你人品好极了！

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