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Polysciences/Full Spectrum™/5 ml/BLI885B-5
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Multi-colorReferenceStandardsarehighlyuniformmicrosphereswhichfluoresceoverabroadrangeofthespectrumtoprovideseveralreferencepositionsinmulti-detectoranalysis.ThisstandardisusedtoproperlyalignyourflowcytometerexcitedfromUVtonearIR;thisstandardemitsovertheentirespectrum.
Atestrequiresonedrop(50μl)ofparticlesUSPension,whichisequivalentto~100,000particles.BangsFlowCytometryStandardsare7-9μmindiametertoapproximatethesizeofhumanlymphocytes.
Availableinthreetestsizevolumes:
A-20tests(1ml)
B-100tests(5ml)
C-280tests(2x7ml)
polysciences是一家化学品制造公司，产品广泛应用于各个科研领域。公司成立于1961年，起初为电子显微镜提供纳米级样本制备方案，帮助科学家揭示未知领域。随后，开拓了在病理（组织研究）应用产品，使组织除了石蜡包埋外，还能够包埋在塑料块中；开发染料和染色剂，以实现更好的样品观测方式。与政府机构合作，开发了用于诊断试剂盒应的聚合物微球。与美国国家癌症中心合作，开发天然产物分离和纯化产品，并用于紫杉醇的初步临床试验。继而开发出超顺磁珠，用于DNA、蛋白质和肽的研究。Polysciences的高纯度单体和聚合物产品在医疗器械中有许多应用，并不断开发和增强其性能。近期业务扩展到电子产品，Polysciences的精密微粒子产品拓展了纳米技术应用中测量精度。公司秉承为应用而研发，目前已拥有超过3000种产品。PolysciencesInc.致力于提供先进的技术、制造能力和技术支持，帮助客户实现他们的目标。
Polysciences, Inc. 成立于1961年，总部位于宾夕法尼亚州沃灵顿，是一家生产研发化学产品的公司。该公司的产品种类已经累计超过3000种，其产品的特点是体积小，附加值高。 Polysciences产品主要包含： 1、 单体和聚合物 2、 微球和粒子（有机、无机、可生物降解、磁珠、荧光素、染料、特异性抗体和蛋白包被颗粒，直径从40nm到10mm）用于核酸提取、蛋白分离和纯化等。 3、 高性能粘合剂、涂料和密封剂 国际上推出了一些阳离子聚合物基因转染技术，以其适用宿主范围广，操作简便，对细胞毒性小，转染效率高受到研究者们的青睐。其中树枝状聚合物（Dendrimers）和Polysciences聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）的转染性能最佳，但树枝状聚合物的结构不易于进一步改性，且其合成工艺复杂。Polysciences聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔二个碳个原子，即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”(protonsponge)体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞，其效果好于脂质聚酰胺，经进一步的改性后，其转染性能好于树枝状聚合物，而且它的细胞毒性低。大量实验证明，PEI是非常有希望的基因治疗载体。目前在设计更复杂的基因载体时，PEI经常做为核心组成成分。 转染技术新宠-Polysciences阳离子聚合物基因转染技术 其优点：适用宿主广泛，操作简便，细胞毒性小，转染率高。其中聚乙烯亚胺（PEI）的转染性能最好。聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔两个碳原子，就是第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何PH下都能充当有效的“质子海绵”体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞，其效果好于脂质聚酰胺，而且细胞毒性低。大量实验证明，PEI是非常有希望的基因治疗载体。目前在设计更复杂的基因载体时，PEI经常做为核心组成成分。 Polysciences线性聚乙烯亚胺（LinePEI）转染复合物的细胞毒性低，有利于细胞定位，而且转染率极高。 Polysciences公司的两款明星产品线性聚乙烯亚胺（23966-1和24765-1）近年来越来越多的受到研究者们的青睐。其产品被运用到大量的转染实验中，也出现在大量的文献中。
美国POLYSCIENCES公司成立于1961年，主要生产和经营LIFESCIENCES生命科学（胶体金,不含甲醛的甲醇等），病理学和显镜学微球和粒子和磁珠各种单体和聚体等产品。polysciences公司是世界上zui大zui全的多聚化合物供应商,同时是世界*的免疫学,组织化学试剂耗材供应商.
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
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2021-09-11
Materials Needed20ml glass scintillation vial Small stir bar Foil Glycerol 1X PBS Pipets * P-phenylenediamine ( EMD Chemicals Inc. Cat# PX0730) Carbonate-Bicar 查看更多
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2021-08-11
细胞裂解分析化学,论坛,化学分析,仪器分析,分析测试,色谱,电泳,光谱u5kLlIOT采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质－蛋白质分析化学论坛~O/b:te} 相互作用，多采用非离子变性剂（NP40或Triton X-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的，通过经验确定。 不能用高浓度的变性剂（0.2％ 查看更多
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Vital Staining of Chromosomes with Hoechst 332581. Hoechst 33258, 10 mg/ml stock in DMSO. 2. Culture medium. 3. 15 ml sterile conical tube. 1. In a 15 ml conic 查看更多
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2021-09-14
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2021-08-28
1.AimPlex流式高通量多因子检测技术特点 基于流式细胞术的高通量多因子检测技术----AimPlex Multiple Immunoassays for Flow，结合了酶联免疫吸附实验（ELISA）、微球技术和流式细胞术（Flow Cytometry）等方法，能同时对对少量样本中多种可溶性蛋白进行高通量检测。近年来，基于微球的多指标检测技术得到广泛的推广，与传统ELISA技术只能检测一个指标相比，该技术能够实现从一份标本 查看更多
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2021-09-04
Sepharose 4B-CL Chromatography BAC DNA Purification for Transgenic ProductionThis method was contributed by Wes Dunnick at the University of Michigan Medical S 查看更多
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2021-09-23
Making Boiled Donkey (or whatever) Serum (BDS) for Blocking You want a final working concentration of 5% Serum. Order the serum from the same company and organ 查看更多
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2021-09-18
STAINING NONFILAMENTOUS ACTIN WITH VITAMIN-D BINDING PROTEINMaterials1. Gc-globulin (vitamin-D binding protein; Calbiochem 345802), prepare 2 mg/ml stock in PB 查看更多
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2021-08-12
1. 注意事项：1.1. 欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 ％致密度。1.2. 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。不宜将冻存细胞放置在0℃～-60℃这一温度范围内过久，低温损伤主要发生在这一温 查看更多
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2021-09-15
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2021-08-23
Fixation and permeabilization protocol 5/30/91 Mike FinneyThis protocol works for all stages except dauers (which won"t open) andhypoclorite-treated eggs (whic 查看更多
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2021-09-09
Exalpha Biologicals produces and sells products for Life Science Research, including monoclonal and polyclonal antibodies, for use in immunohistochemistry, wes 查看更多
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【求助】关于荧光定量RQPCR中定量方法的两个求助问题!123
zhoubinbj2021-07-25
小弟就要进行荧光定量试验，所以在园子里面看了很多的资料？，真是似懂非懂，出现了很多的疑问，所以恳请各位指教一下，有些可能比较弱智，请各位不要见笑！非常感谢！
1.我知道一般缺省域值是3－15个循环荧光强度的标准方差的10倍，但是为什么公式是10×SD（6－15）？那仪器的本底荧光强度是前15个循环的荧光强度就算是baseline，那么仪器中用域值分析和用baseline分析有什么不同？域值能否改动？改动后的结果对于后续的分析有什么影响？一般什么时候需要改动？
2.所谓读板温度是不是就是每一部反应后检测荧光强度的步骤？是不是可以任意设定在某一步骤？譬如变性，退火，延伸甚至自己设定一个温度？
3.在做标准曲线的时候，对于标准品的要求是不是一般要求就是待扩增的目的片断，便于以后的扩增效率可比性？是不是这个也是购买的绝对标准品进行曲线作图的缺陷之一，虽然其绝对的定量已知？
4.在相对定量时候，如果内参和目的基因在同一管中进行扩增就是内参照法?不同管就是外参照法？是不是不太赞成内参照法，因为无法预知目的基因起始浓度，从而可能导致内参扩增效率远远大于目的基因而无法使用2-△△CT方法分析？
5.融解曲线的导出是不是在反应结束以后进行？融解曲线出现主峰异常增宽是什么原因导致？我还是不明白探针法是如何得出融解曲线的，主要是原理，因为染料法就是升高温度双链解链染料脱离？
6.如果用荧光染料方法进行试验，出现引物二具体很多，那么在NTC和加入模板的溶解曲线中dimer的峰值和模板中的峰值是否重叠？
敬请指教！非常感谢！
1.我知道一般缺省域值是3－15个循环荧光强度的标准方差的10倍，但是为什么公式是10×SD（6－15）？那仪器的本底荧光强度是前15个循环的荧光强度就算是baseline，那么仪器中用域值分析和用baseline分析有什么不同？域值能否改动？改动后的结果对于后续的分析有什么影响？一般什么时候需要改动？
2.所谓读板温度是不是就是每一部反应后检测荧光强度的步骤？是不是可以任意设定在某一步骤？譬如变性，退火，延伸甚至自己设定一个温度？
3.在做标准曲线的时候，对于标准品的要求是不是一般要求就是待扩增的目的片断，便于以后的扩增效率可比性？是不是这个也是购买的绝对标准品进行曲线作图的缺陷之一，虽然其绝对的定量已知？
4.在相对定量时候，如果内参和目的基因在同一管中进行扩增就是内参照法?不同管就是外参照法？是不是不太赞成内参照法，因为无法预知目的基因起始浓度，从而可能导致内参扩增效率远远大于目的基因而无法使用2-△△CT方法分析？
5.融解曲线的导出是不是在反应结束以后进行？融解曲线出现主峰异常增宽是什么原因导致？我还是不明白探针法是如何得出融解曲线的，主要是原理，因为染料法就是升高温度双链解链染料脱离？
6.如果用荧光染料方法进行试验，出现引物二具体很多，那么在NTC和加入模板的溶解曲线中dimer的峰值和模板中的峰值是否重叠？
敬请指教！非常感谢！
实时荧光定量PCR具体实验步骤 实验方法123
yongjunzhang2021-08-09
荧光实验用哪种CCD比较好_问答详情_荧光染料标准品_标准品_生化...123
癧℡2018-01-17
没图片
既说像坐标画曲线曲线应纵轴该荧光强度吧轴数值变化代表荧光强度变化荧光强度变化代表钙离浓度变化 我觉直接用荧光强度值变化代替钙离浓度变化研究意义该钙离浓度变化吧
非要荧光强度值换算钙离浓度需要做列工作
1 取标准钙离浓度染色用共聚焦显微镜测荧光强度
2 标准品需要同像环境主要曝光间相同激光波及能量
3 标准品要用同浓度荧光染料
才能根据标准荧光强度关系推算品钙离浓度
既说像坐标画曲线曲线应纵轴该荧光强度吧轴数值变化代表荧光强度变化荧光强度变化代表钙离浓度变化 我觉直接用荧光强度值变化代替钙离浓度变化研究意义该钙离浓度变化吧
非要荧光强度值换算钙离浓度需要做列工作
1 取标准钙离浓度染色用共聚焦显微镜测荧光强度
2 标准品需要同像环境主要曝光间相同激光波及能量
3 标准品要用同浓度荧光染料
才能根据标准荧光强度关系推算品钙离浓度
中国首家！紫光安全芯片获得全球最高等级认证：实现零突破123
入我相思门12342021-08-21
1、不同物品要求含荧光剂量是不一样的。2、“荧光剂作为一种添加剂或者染料等，在具体的使用上有法律规定，不同的用途和产品，规定肯定不一样。”
一、荧光剂又名荧光增白剂，是一种荧光染料，或称为白色染料，也是一种复杂的有机化合物。它的特性是能吸收入射光线产生荧光，使所染物质获得类似荧石的闪闪发光的效应，使肉眼看到的物质很白，达到增白的效果。二、用途介绍1、荧光增白剂BC性能及用途 外观为淡黄色粉末。色光以与标准近似，溶于水呈蓝色荧光，不溶于水杂质含量0.5%,强度为标准品的1005,细度(通过100目筛残余物含量)5%,泛黄点5%,水分含量5%。本品主要用于棉纤维、人造丝、人造棉和纸浆等中性染浴增白处理。2、荧光增白剂JD-3 性能及用途 外观为淡黄色粉末，能溶于热水。本品在中性或微碱性条件下，用于合成洗涤剂、肥皂、造纸和纺织品的增白。3、荧光增白剂挺进31#性能及用途 外观为淡黄色粉末，具有一般二苯乙烯三嗪型增白剂性能。荧光色调为青光，呈阴离子型。可溶于100℃或1000倍25℃水中。水分含量5%，不溶于水的杂质含量0.5%。本品主要用于合成洗涤剂、肥皂、香皂、纸张的增白，也用于棉织物、锦纶、人造丝等的增白，可使被增白物增白发亮。4、荧光增白剂BR（增白剂BL）成 分 DSD酸钠盐与异氰酸苯酯的缩合物性能及用途 外观为淡黄色粉末，属阴离子型，微带红紫色。2%水溶液澄清，95%以上通过60目筛。5、荧光增白剂EBF成 分 邻氨基苯酚与2，5-二羧酸噻吩的缩合物性能及用途 外观为细微黄白色悬浮液。有鲜艳的蓝色荧光。含有效荧光物质10%，属非离子型，呈中性，可与水以任何比例稀释分散。耐硬水、耐酸、耐碱、耐晒，氧化漂白稳定。增白强度与标准品相似，能与大多数施用于白色织物的整理剂和染色载体共用。酸碱度为10g/L，分散液pH6。本品主要用于涤纶、锦纶和醋纤的增白，也可用于合纤与棉、毛混纺织物的增白。6、荧光增白剂R成 分 DSD酸钠盐与异氰酸苯酯的缩俣物性能及用途 外观为白色至淡黄色粉末。阴离子型。95%以上通过60目筛。0.2%水溶液澄清。本品主要用于纤维、纸张、白地印染增白和浅色纤维增艳。7、 荧光增白剂AD（荧光增白剂CA）成 分 对氯代--吗啉基丙酰苯盐酸盐与对甲磺酰苯肼盐酸盐的缩合性能及用途 外观为带绿光的淡黄色细针状结晶。本品主要用作合成纤维的增白剂。8、荧光增白剂ER（增白剂PS-1）性能及用途 强度为标准品的1003，色光与标准品近似，非离子型，在水中均匀分散。本品用于涤纶、涤/棉混纺织物的增白。用其处理的织物白度高、色光纯。具有优异的耐洗、耐晒和耐升华牢度。二、实验证明（1）对皮肤无刺激经过多年的动物及人体试验表明：即使是皮肤直接接触荧光增白剂CBS纯品，对皮肤也无刺激性，不会导致皮肤过敏。沈永嘉教授等编写的《荧光增白剂》一书中指出：荧光增白剂不会被皮肤吸收。即使荧光增白剂CBS在使用过程中可能有少量粘附在皮肤上，也不会和人体皮肤发生反应，而且通过日常的洗涤活动（例如洗手、洗澡等）很容易被完全的洗掉，不会经皮吸收[1] 。因此，皮肤直接与添加CBS的洗衣液接触不会造成伤害。（2）对伤口愈合无不良影响发表于1994年《德国皮肤病学》杂志上的《荧光增白剂的毒理学性质》一文中指出，即使是用含有荧光增白剂的纺织材料直接接触伤口，也不会对伤口愈合产生不良影响，且不会对人体皮肤造成病理性变化。（3）代谢：荧光增白剂CBS是水溶性的，通过正常代谢可很快完全排出体外德国Georg Thieme出版社出版的《环境质量和安全》增补第四卷《荧光增白剂》（`Environmental Quality and Safety` Supplement Volume IV `Fluorescent Whitening Agents`）一书中指出，通过小鼠代谢研究表明，在大剂量喂食洗涤剂用荧光增白剂CBS后，绝大部分增白剂都会迅速通过肠道排出，不被肠道吸收。其血、肝、肾、脑、肌肉和脂肪中均无荧光增白剂残留，即不会造成体内蓄积。所以日常生活中即使有少量荧光增白剂CBS进入人体，也会通过正常代谢过程很快排出体外。（4）荧光增白剂CBS无致畸性，无致癌性通过对多种动物的急性毒性研究和长达两年的小鼠慢性毒理实验研究证明：CBS属于无毒性物质，无致畸、无致癌、无致突变性。三、结论总之，在正常使用剂量下，含有荧光剂都是安全的。参考资料荧光剂：https://baike.baidu.com/item/%E8%8D%A7%E5%85%89%E5%89%82/6185591?fr=aladdin#2
一、荧光剂又名荧光增白剂，是一种荧光染料，或称为白色染料，也是一种复杂的有机化合物。它的特性是能吸收入射光线产生荧光，使所染物质获得类似荧石的闪闪发光的效应，使肉眼看到的物质很白，达到增白的效果。二、用途介绍1、荧光增白剂BC性能及用途 外观为淡黄色粉末。色光以与标准近似，溶于水呈蓝色荧光，不溶于水杂质含量0.5%,强度为标准品的1005,细度(通过100目筛残余物含量)5%,泛黄点5%,水分含量5%。本品主要用于棉纤维、人造丝、人造棉和纸浆等中性染浴增白处理。2、荧光增白剂JD-3 性能及用途 外观为淡黄色粉末，能溶于热水。本品在中性或微碱性条件下，用于合成洗涤剂、肥皂、造纸和纺织品的增白。3、荧光增白剂挺进31#性能及用途 外观为淡黄色粉末，具有一般二苯乙烯三嗪型增白剂性能。荧光色调为青光，呈阴离子型。可溶于100℃或1000倍25℃水中。水分含量5%，不溶于水的杂质含量0.5%。本品主要用于合成洗涤剂、肥皂、香皂、纸张的增白，也用于棉织物、锦纶、人造丝等的增白，可使被增白物增白发亮。4、荧光增白剂BR（增白剂BL）成 分 DSD酸钠盐与异氰酸苯酯的缩合物性能及用途 外观为淡黄色粉末，属阴离子型，微带红紫色。2%水溶液澄清，95%以上通过60目筛。5、荧光增白剂EBF成 分 邻氨基苯酚与2，5-二羧酸噻吩的缩合物性能及用途 外观为细微黄白色悬浮液。有鲜艳的蓝色荧光。含有效荧光物质10%，属非离子型，呈中性，可与水以任何比例稀释分散。耐硬水、耐酸、耐碱、耐晒，氧化漂白稳定。增白强度与标准品相似，能与大多数施用于白色织物的整理剂和染色载体共用。酸碱度为10g/L，分散液pH6。本品主要用于涤纶、锦纶和醋纤的增白，也可用于合纤与棉、毛混纺织物的增白。6、荧光增白剂R成 分 DSD酸钠盐与异氰酸苯酯的缩俣物性能及用途 外观为白色至淡黄色粉末。阴离子型。95%以上通过60目筛。0.2%水溶液澄清。本品主要用于纤维、纸张、白地印染增白和浅色纤维增艳。7、 荧光增白剂AD（荧光增白剂CA）成 分 对氯代--吗啉基丙酰苯盐酸盐与对甲磺酰苯肼盐酸盐的缩合性能及用途 外观为带绿光的淡黄色细针状结晶。本品主要用作合成纤维的增白剂。8、荧光增白剂ER（增白剂PS-1）性能及用途 强度为标准品的1003，色光与标准品近似，非离子型，在水中均匀分散。本品用于涤纶、涤/棉混纺织物的增白。用其处理的织物白度高、色光纯。具有优异的耐洗、耐晒和耐升华牢度。二、实验证明（1）对皮肤无刺激经过多年的动物及人体试验表明：即使是皮肤直接接触荧光增白剂CBS纯品，对皮肤也无刺激性，不会导致皮肤过敏。沈永嘉教授等编写的《荧光增白剂》一书中指出：荧光增白剂不会被皮肤吸收。即使荧光增白剂CBS在使用过程中可能有少量粘附在皮肤上，也不会和人体皮肤发生反应，而且通过日常的洗涤活动（例如洗手、洗澡等）很容易被完全的洗掉，不会经皮吸收[1] 。因此，皮肤直接与添加CBS的洗衣液接触不会造成伤害。（2）对伤口愈合无不良影响发表于1994年《德国皮肤病学》杂志上的《荧光增白剂的毒理学性质》一文中指出，即使是用含有荧光增白剂的纺织材料直接接触伤口，也不会对伤口愈合产生不良影响，且不会对人体皮肤造成病理性变化。（3）代谢：荧光增白剂CBS是水溶性的，通过正常代谢可很快完全排出体外德国Georg Thieme出版社出版的《环境质量和安全》增补第四卷《荧光增白剂》（`Environmental Quality and Safety` Supplement Volume IV `Fluorescent Whitening Agents`）一书中指出，通过小鼠代谢研究表明，在大剂量喂食洗涤剂用荧光增白剂CBS后，绝大部分增白剂都会迅速通过肠道排出，不被肠道吸收。其血、肝、肾、脑、肌肉和脂肪中均无荧光增白剂残留，即不会造成体内蓄积。所以日常生活中即使有少量荧光增白剂CBS进入人体，也会通过正常代谢过程很快排出体外。（4）荧光增白剂CBS无致畸性，无致癌性通过对多种动物的急性毒性研究和长达两年的小鼠慢性毒理实验研究证明：CBS属于无毒性物质，无致畸、无致癌、无致突变性。三、结论总之，在正常使用剂量下，含有荧光剂都是安全的。参考资料荧光剂：https://baike.baidu.com/item/%E8%8D%A7%E5%85%89%E5%89%82/6185591?fr=aladdin#2
LS45/55 荧光/磷光/发光分光光度计使用说明书123
yunzhongying2021-07-29
请教各位高手，荧光分光光度法测物质的含量是否必须绘制标准曲线？如果不做标准曲线，能不能用Beer定律一类的公式来计算物质的相对含量？请做过荧光分光光度法的高手指点一下，如果有这方面的操作说明，尤其是如何计算待检物质含量的例子，能否说一下，先谢谢了。邮箱wzhnanhua@eyou.com
常用抗体标记荧光染料的选择 实验方法123
尼玛君ekN2021-07-30
溴化乙锭通过嵌入碱基之间而与DNA结合，进而使双螺旋解旋。由此导致线状DNA的长度有所增加，作为补偿，将在闭环质粒DNA中引入超螺旋单位。最后，超螺旋度大为增加， 从而阻止了溴化乙锭分子的继续嵌入。但线状分子不受此限，可继续结合更多溴化乙锭，直至达到饱和( 每2个碱基对大约结合1个溴化乙锭分子) 。由于染料的结合量有所差别，线状和闭环DNA分子在含有饱和量溴化乙锭的氯化铯度中的浮力密度也有所不同。多年来，氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心已成为制备大量质粒DNA 的首选方法。然而该过程既昂贵又费时，为此发展了许多替代方法。其中主要包括利用离子交换层析、凝胶过滤层析、分级沉淀等分离质粒DNA和宿主DNA的方法。尽管这些方法大多数均被束之高阁，但其中最好的方法，也应是聚乙二醇分级沉淀法。
从大肠杆菌细胞中分离质粒DNA的方法众多，其分离的依据可利用分子大小不同，碱基组成的差异以及质粒DNA的超螺旋共价闭合环状结构的特点来进行。碱基性法抽提效果良好，既经济且得率较高。抽提到的质量DNA可用于酶切、连接和转化。对于分子量较大拷贝较少对的质粒DNA，由于DNA片段较大易于损伤断裂，因此选用吕华铯密度超高离心法抽提DNA，且具有纯度高、步骤少、方法稳定且获得的质量DNA是超螺旋构型等特点。对于高拷贝数质粒，用少量制备法抽提质粒DNA就有足够量可用于基因操作。
质粒DNA纯化的试验步骤：
测量DNA溶液的体积，按lg/ml的用量精确地加入固体CsCl, 将溶液加温至30℃助溶。温和地混匀溶液直到盐溶解。
每10mlDNA溶液加入0.8ml溴化乙锭溶液（10mg/ml溶于水）；立即将溴化乙锭溶液（漂浮在表层）与DNA－氯化铯溶液混匀， 溶液的终密度应为1.55g/ml（溶液的折射率为1.3860）溴化乙锭浓度大约740μg/ml。【溴化乙锭贮存液应贮存于避光容器内（如用锡箔完全包裹的瓶子），于室温保存。
室温下用Sorvall SS34头（或与其相当的转头）以8000rpm离心5min， 浮在溶液上面的水垢状浮渣是溴化乙锭和细菌蛋白所形成的复合物。
用巴斯德吸管或带大号针头的一次性注射器将浮渣下的清亮红色溶液转移到离心管中。用轻石蜡油加满管的其余部分并封口。
以20℃对所得的密度梯度以45 000rpm离心16h（VTi65 转头）、 以45 000rpm离心48h（Ti50转头）、以60 000rpm离心24h（Ti65转头）或者以60 000rpm离心24h（Ti70.1转头）。普通光照下，在梯中心可见两条DNA区带， 上部区带材料通常较少，由线状的细菌（染色体）DNA和带切口的环状质粒DNA组成：下部区带则由闭环质粒DNA组成。管底部深红色的沉淀是溴化乙锭RNA复合物，位于CsCl溶液和石蜡油之间的是蛋白质。Beckman Quick-Seal离心管中的CsCl－溴化乙锭梯度可容纳4mg 闭环质粒DNA而不至超负荷。如有更大量的质粒存在，将扩展为一条宽带，并与染色体DNA相重叠。这种问题只有在质粒复制达到极高水平时才会出现，只要将该质粒提取物分为2个梯度即可解决。如出现负荷，可收集整个DNA区高产水平时才会出现，只要将该质粒提取物分为2个梯度即可解决。如出现超负荷，可收集整个DNA区带，用CsCl溶液（ρ=1.58g/ml）将体积调到15ml，在两个离心管中再度离心，使DNA达到平衡。
收集DNA带。将21 号皮下注射针头插入管的顶端以使空气进入，为尽量减少污染的机会，首先用18号皮下注射针头按下述方法收集上部的区带（杂色体DNA）：用乙醇小心擦拭管外壁以除去任何油脂，然后将一块Soctch胶带贴于管外壁。穿过Soctch胶带将18号皮下注身针头（其斜面向上）插入管中，以便使针头的斜面开口恰好位于染色体DNA区带之下并与该区带相平行。将粘稠状DNA收集到一次性使用的管内，用造型粘土块封住皮下注射针头的末端并将第2根针头留于原处。 穿过Soctch 胶带插入第3根皮下注射针头（18号），将下部的质粒DNA区带收集到玻璃或塑料管中。展开
从大肠杆菌细胞中分离质粒DNA的方法众多，其分离的依据可利用分子大小不同，碱基组成的差异以及质粒DNA的超螺旋共价闭合环状结构的特点来进行。碱基性法抽提效果良好，既经济且得率较高。抽提到的质量DNA可用于酶切、连接和转化。对于分子量较大拷贝较少对的质粒DNA，由于DNA片段较大易于损伤断裂，因此选用吕华铯密度超高离心法抽提DNA，且具有纯度高、步骤少、方法稳定且获得的质量DNA是超螺旋构型等特点。对于高拷贝数质粒，用少量制备法抽提质粒DNA就有足够量可用于基因操作。
质粒DNA纯化的试验步骤：
测量DNA溶液的体积，按lg/ml的用量精确地加入固体CsCl, 将溶液加温至30℃助溶。温和地混匀溶液直到盐溶解。
每10mlDNA溶液加入0.8ml溴化乙锭溶液（10mg/ml溶于水）；立即将溴化乙锭溶液（漂浮在表层）与DNA－氯化铯溶液混匀， 溶液的终密度应为1.55g/ml（溶液的折射率为1.3860）溴化乙锭浓度大约740μg/ml。【溴化乙锭贮存液应贮存于避光容器内（如用锡箔完全包裹的瓶子），于室温保存。
室温下用Sorvall SS34头（或与其相当的转头）以8000rpm离心5min， 浮在溶液上面的水垢状浮渣是溴化乙锭和细菌蛋白所形成的复合物。
用巴斯德吸管或带大号针头的一次性注射器将浮渣下的清亮红色溶液转移到离心管中。用轻石蜡油加满管的其余部分并封口。
以20℃对所得的密度梯度以45 000rpm离心16h（VTi65 转头）、 以45 000rpm离心48h（Ti50转头）、以60 000rpm离心24h（Ti65转头）或者以60 000rpm离心24h（Ti70.1转头）。普通光照下，在梯中心可见两条DNA区带， 上部区带材料通常较少，由线状的细菌（染色体）DNA和带切口的环状质粒DNA组成：下部区带则由闭环质粒DNA组成。管底部深红色的沉淀是溴化乙锭RNA复合物，位于CsCl溶液和石蜡油之间的是蛋白质。Beckman Quick-Seal离心管中的CsCl－溴化乙锭梯度可容纳4mg 闭环质粒DNA而不至超负荷。如有更大量的质粒存在，将扩展为一条宽带，并与染色体DNA相重叠。这种问题只有在质粒复制达到极高水平时才会出现，只要将该质粒提取物分为2个梯度即可解决。如出现负荷，可收集整个DNA区高产水平时才会出现，只要将该质粒提取物分为2个梯度即可解决。如出现超负荷，可收集整个DNA区带，用CsCl溶液（ρ=1.58g/ml）将体积调到15ml，在两个离心管中再度离心，使DNA达到平衡。
收集DNA带。将21 号皮下注射针头插入管的顶端以使空气进入，为尽量减少污染的机会，首先用18号皮下注射针头按下述方法收集上部的区带（杂色体DNA）：用乙醇小心擦拭管外壁以除去任何油脂，然后将一块Soctch胶带贴于管外壁。穿过Soctch胶带将18号皮下注身针头（其斜面向上）插入管中，以便使针头的斜面开口恰好位于染色体DNA区带之下并与该区带相平行。将粘稠状DNA收集到一次性使用的管内，用造型粘土块封住皮下注射针头的末端并将第2根针头留于原处。 穿过Soctch 胶带插入第3根皮下注射针头（18号），将下部的质粒DNA区带收集到玻璃或塑料管中。展开
【求助】紧急求助。关于TD20/20光度计标准曲线的制作 制剂技术...123
winne_jin2021-07-24
常用荧光染料及应用领域 123
zishuyu2018-01-17
还可以标记细胞内的某些蛋白吧
一种具有双荧光基团的质粒及其作为标准品的应用的制作方法123
jiang2265002021-08-03
想问一下各位大侠提质粒时用的是那个公司的试剂盒呀？我的扩增荧光增量一直不是很高，而且作为被动参比的ROX信号比FAM的基线部分高很多，不知是不是质粒的质量不好造成的。
所以想请大家给推荐一个效果好的最好是国产的质粒提取试剂盒。
多谢！
所以想请大家给推荐一个效果好的最好是国产的质粒提取试剂盒。
多谢！
荧光染料cfse_荧光染料cfse商家/厂家/公司/123
刘嘿哈2012018-01-17
http://www.dojindo.cn/products/C/cfse.htm
荧光染料与多少dna结合肉眼可见颜色变化123
伤逝_JaynE羣2018-01-17
碘化丙啶(propiolium iodide，PI)能嵌入DNA双螺旋中，可使荧光强度增加约20倍，以488nm波长激发，DNA/PI复合物最大的发射波长约为615nm。小鼠Lewis肺癌细胞DNA含量测定方法(1).从C57BL/6小鼠上切除肿块，在培养皿内用PBS冲洗。(2).去除结缔组织及，剪碎肿块。(3).小碎片移入1.20×38mm针,加压使其通过,于4℃条件下重悬细胞于HBSS中。(4).将200～300μL细胞悬液(5×105细胞/mL)中加入3mL PI(50μg/mL)，染色3LL细胞，于4℃存放20～30分钟。(5).测定580～750nm之间的发射荧光，以去除末结合PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分。注：PI染色液：0.1%柠檬酸钠1000mL+PI 5mg + 1% Nonide P40水。2. 培养细胞DNA的流式细胞仪分析(1).从培养皿中吸去培养基，以HBSS冲洗二次。(2).加入PI5mL于培养皿中，在4℃放10分钟。(3).用吸管反复次打细胞，使细胞破坏，胞核释放出来，再行流式细胞仪分析。3. 完整细胞DNA的PI染色(1).70%乙醇固定的细胞悬液，离心，去固定液。(2).室温条件下加入PI染色一批细胞（105～106细胞/mL），时间为30分钟，然后行流式细胞仪分析。（二）吖啶橙染色1. DNA和RNA的鉴别染色利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定，非固定细胞核酸，或作溶酶体的一种标记。观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果，但该方法已被许多实验室广泛采用。方法如下：1）试剂：（1）溶液A：低温保存，稳定期约2周。Triton X-100(0.1%) 0.1mL，1mol/L HCL 8mL1mol/L NaCL 15ml蒸馏水76mL，P
如何去除荧光定量pcr 中的背景值123
vhgp5032018-01-17
背景校正程序测量定量PCR仪所使用的反应管和水的空白荧光强度。在运行校正程序期间，定量PCR仪在10分钟内连续读取背景校正板的荧光强度，信号收集的温度为60°C。随后，SDS软件计算所收集到的荧光强度的平均值，提取结果并保存到校正文件中。软件在今后的分析中将自动调用此校正文件，从实验数据中扣除背景信号。
什么是纯荧光校正，多长时间校正一次：
纯荧光校正是测定各种纯荧光染料标准品的波长和信号强度，通俗地说是让仪器“认识”各种荧光染料。软件收集并储存各种纯荧光染料标准品的荧光信息。以后每次定量实验运行过程中，SDS软件收集样品的原始光谱信号，并将此原始光谱与纯荧光文件中的数据进行比较，精确扣除不同染料的信号重叠部分，从而确定样品中的荧光染料种类和信号强度。
推荐每半年进行一次纯荧光校正。在运行光谱校正之前，请先进行背景校正和ROI校正。
什么是纯荧光校正，多长时间校正一次：
纯荧光校正是测定各种纯荧光染料标准品的波长和信号强度，通俗地说是让仪器“认识”各种荧光染料。软件收集并储存各种纯荧光染料标准品的荧光信息。以后每次定量实验运行过程中，SDS软件收集样品的原始光谱信号，并将此原始光谱与纯荧光文件中的数据进行比较，精确扣除不同染料的信号重叠部分，从而确定样品中的荧光染料种类和信号强度。
推荐每半年进行一次纯荧光校正。在运行光谱校正之前，请先进行背景校正和ROI校正。
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