含有目的基因真核表达 pEGFPC1载体的构建实验一转化
实验方法原理 | 转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株,即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(Rˉ,Mˉ),它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法(如电击法,CaCl2)处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞(Competentcells)。进入受体细胞的DNA分子通过复制,表达实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养,即可筛选出转化子(Transformant),即带有异源DNA分子的受体细胞)。 | ||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
实验材料 | 重组质粒 试剂、试剂盒 | SOC液体培养基LB液体培养基JM109DH5αAmpKan 仪器、耗材 | LB平板 实验步骤 | 1. 100ul感受态细胞在冰中融化。 2. 分装2管,50ul/管。 3. 加入转化的DNAXul。 4. 冰中放置30min。 5. 42℃放置90sec。 6. 冰中放置2~3min。 7. 加入4倍体积的SOC液体培养基或LB液体培养基。 8. 37℃振荡培养1hrs。 9. 涂平板,37℃温箱培养12~16hrs。 注意事项 | 1. 加入DNA的量要小于10ng,DNA的量过高影响转化效率。 2. SOC培养基可以用LB培养基替代,但是转化率低于使用SOC培养基。 3. 热激温度42℃一定要准确,否则影响转化效率。 |
免责声明 本文仅代表作者个人观点,与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实,对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺,请读者仅作参考,并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的,应该授权范围内使用,并注明“来源:蚂蚁淘”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
发布于 : 2018-08-10
阅读(106)
▍
相关分类
▍
相关文章