微生物鉴定中常用的生理生化试验
郭森
09
级生命基地
200900140029
周二下午
第五排
摘要：
本次实验包括大分子水解试验、
糖发酵试验和
IMViC
试验
（吲哚、
甲基红试验）
三类试验，
根据要求本实验使用六种培养基分别对所需菌种组合进行了大约
24h
的培养，
之
后按照实验要求进行各个试验。
最后基本上观察到了实验现象，
了解了所用菌种鉴别的方法
和原则。
关键词：
微生物鉴定；生理生化试验；大分子水解试验；糖发酵试验；
IMViC
试验
前言：
不同种类的微生物有着不同的代谢类型，例如对一些物质的分解能力及分解代
谢的产物的不同反映出他们不同的生理特征，
这些特征可以用来对不同种类微生物进行鉴定
和分类。因此可以对微生物的不同生化反应进行试验，以此证明微生物生理特征的多样性，
证明微生物分类鉴别的依据。
生理生化试验相比其他鉴别方法而言相对简便、
快捷、
经济实
用，在一般的实验室中都可以进行，因此在微生物种类的初步鉴别中被广泛使用。
1
材料和方法
1.1
材料
1.1.1
菌种
枯草芽孢杆菌
(
Bacillus
subtilis
)
，
大肠杆菌
（
Esherichia
coli
）
，
金黄色葡萄球菌
（
Staphylococcus
aureus
）
，
普通变形菌（
Proteus
vulgaris
），铜绿假
单胞菌（
Pseudomonas
aeruginosa
），产气
肠杆菌
(
Enterobacteraerogenes
)
。
1.1.2
培养基
固体淀粉培养基，固体油
脂培养基，
葡萄糖发酵培养基，
乳糖培养基，
蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基
。
1.1.3
溶液和试剂
卢戈式碘液，
甲基红
指示剂，乙醚和吲哚试剂等。
1.1.4
仪器和其他用品
无菌平板，无
菌试管，接种环，接种针和试管架等。
1.2
方法
1.2.1
制作培养基
1.2.1.1
淀粉培养基
分别取
3g
蛋白胨、
1.5gNaCl
、
1.5g
牛肉膏、
0.76g
可溶性淀
粉和
5~6.7g
琼脂放入
300ml
蒸馏水中加热
融化，最后总体积在
250ml
左右，
121
℃灭
菌
20min
。
1.2.1.2
油脂培养基
先分别取
3g
香油或
花生油、
5~6.7g
琼脂和
300ml
蒸馏水加热融
化，
然后再分别取
3g
蛋白胨、
1.5g
牛肉膏、
1.5g
NaCl
加热，调节
pH
至
7.2
，然后再加
入
0.3ml1.6%
中性红水溶液。分装时，不
断搅拌，
使油脂均匀分布于培养基中，
121
℃
灭菌
20min
。
1.2.1.3
糖发酵培养基（葡萄糖和乳糖）
取
300ml
蛋白胨水培养基、
0.3~0.6ml1.6%
溴甲酚紫乙醇溶液混合并调节
pH
至
7.6
，
另
配
20%
糖溶液
（葡萄糖、
乳糖等）
每管各
10ml
（
1
）
将含指示剂的蛋白胨水培养基
（
pH7.6
）
分装于试管中，
在每管内放一倒置的小玻璃
管（
Durhamtube
），使充满培养液。
（
2
）
将已分装好的蛋白胨水和
20%
的各种糖
溶液分别
121
℃灭菌
20min
。
（
3
）
灭菌后，
每管以无菌操作分别加入
20%
的无菌糖溶液（葡萄糖和乳糖）
0.5ml
（浓
度约为
1%
）。
1.2.1.4
蛋白胨水培养基
取
3g
蛋白胨、
1.5gNaCl
加入到约
300ml
蒸馏水中加热混
合，
调节
pH
至
7.6
，
然后
121
℃灭菌
20min
。
1.2.1.5
葡萄糖蛋白胨水培养基
取
1.5g
蛋白胨、
1.5g
葡萄糖和
0.6gKHPO
溶于
1000ml
水中，调节
pH
至
7.0~7.2
，过滤。
分装试管，每管
10ml
，
121
℃灭菌
20min
。
1.2.2
大分子水解试验
1.2.2.1
淀粉水解试验
（
1
）
将固体培养基熔化后冷却至
50
℃左
