上海西唐生物科技有限公司021-55229872,65333639www.westang.com 人Visfatin定量EIA试剂盒使用说明 原理 本实验采用双抗体夹心ELISA法。用抗人Visfatin单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的Visfatin与单抗结合，加入酶标抗体，形成免疫复合物连接在板上，加入酶底物TMB，出现蓝色，加终止液硫酸，颜色变黄，在450nm处测OD值，Visfatin浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中Visfatin浓度。 试剂盒组成（2-8℃保存） 酶标板（CoatedWells） 96孔 酶标抗体工作液（EnzymeConjugate） 6ml 10×标本稀释液（SampleBuffer） 12ml 20×浓缩洗涤液（WashBuffer） 50ml 标准品（Standards）：5瓶 一套 底物工作液（TMBSolution） 12ml 封板纸 一张 终止液（StopSolution） 12ml 准备试剂与收集血样 1.收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。 2.标准品第一次使用时用0.5ml的蒸馏水溶解，放置半小时混匀后使用，用后放在-20oC保存。溶解后浓度分别为180、100、40、20、10ng/ml。 3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。 4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水） 检测程序 1.建立标准曲线：设标准孔6孔，每孔各加入标准品50ul。第六孔加入标本稀释液50ul，设为空白对照。 2.每孔加酶标抗体工作液50ul。将反应板置37℃反应120分钟。 3.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。 4.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。 5.每孔加入100ul终止液混匀。 6.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。 结果计算与判断 1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。 2.以标准品180、100、40、20、10、0ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。 3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应Visfatin含量。 试剂盒性能 1.灵敏度：最小的Visfatin检测浓度小于5ng/ml。 2.特异性：可同时检测重组或天然的人Visfatin。不与人其它细胞因子有交叉反应。 3.重复性：板内、板见变异系数均小于10％。 注意事项 1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。 2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。 3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。 4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。 5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！
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