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博凌科为的THERMOscript 1st Strand cDNA Synthesis Kit(第一链耐热反转录试剂盒)反转录温度耐受性比较强,效果不错本制品使用通过基因重组技术克隆表达的点突变型 RNase H 活性缺失的 M-MuLV 反转录酶THERMOscript Hˉ RTase 。 同时经过多点突变,提高了反转录温度耐受性,可以在 45-55℃进行反转录。野生型的 M-MuLV 包含的 RNase H 活性能够催化降解 DNA\\/RNA 杂合体中的 RNA,因此 在 cDNA 第一 条链的 合成 反应中 可能 会降 解 RNA\\/DNA 杂合 体中的 模板 RNA 。 本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的 RNase H 活性缺失,与 M-MuLV 相比,具有更强的延伸能力和稳定性,可用于较长的 cDNA 合成以及高比例的全长 cDNA 文库的构建等。同时更高的反转录温度大大的提高了 GC 含量高,二级结构丰富的 RNA 模板的反转录效率。注意事项::1、 避免RNase污染。2、为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。3、如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构,可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀,65℃变性5分钟,冰上冷却,短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
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