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ItemCatalog #DescriptionQuantityPrice (USD)
Plasmid141383Standard format: Plasmid sent in bacteria as agar stab1$75*
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Lentiviral Prep141383-LVVirus (1mL at titer ≥ 5x10⁶ TU/mL)and Plasmid.More Information
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Backbone

  • Vector backbone
    pLVX-EF1alpha-IRES-Puro
    (Search Vector Database)
  • Backbone manufacturer
    Takara Bio
  • Backbone sizew/o insert(bp)8825
  • Vector type
    Mammalian Expression, Lentiviral
  • Selectable markers
    Puromycin

Growth in Bacteria

  • Bacterial Resistance(s)
    Ampicillin
  • Growth Temperature
    30°C
  • Growth Strain(s)
    NEB Stable
  • Copy number
    Unknown

Gene/Insert

  • Gene/Insert name
    SARS-CoV-2-orf3a
  • Species
    SARS-CoV-2
  • Mutation
    human codon optimized
  • Entrez Gene
    ORF3a(a.k.a. GU280_gp03)
  • PromoterEF1alpha
  • Tag/ Fusion Protein
    • 2xStrep (C terminal on insert)

Cloning Information

  • Cloning methodUnknown

Resource Information

  • Supplemental Documents
    • pLVX-EF1alpha-SARS-CoV-2-orf3a-2xStrep-IRES-Puro.gb
  • Terms and Licenses
    • UBMTA
  • Industry Terms
    • Industry MTA

Information for Lentiviral Prep (Catalog # 141383-LV)(Back to top)

Purpose

Ready-to-use Lentiviral Prep particles produced from pLVX-EF1alpha-SARS-CoV-2-orf3a-2xStrep-IRES-Puro (#141383). In addition to the viral particles, you will also receive purified pLVX-EF1alpha-SARS-CoV-2-orf3a-2xStrep-IRES-Puro plasmid DNA.

Lentiviral particles carrying SARS-CoV-2-orf3a. This virus is used to make stable cell lines expressing the SARS-CoV-2-orf3a.

Delivery

  • Volume1mL
  • Titer≥ 5x10⁶ TU/mL
  • Pricing$100 USD for preparation of 1mL virus + $30 USD for plasmid.
  • StorageStore at -80℃. Thaw just before use and keep on ice.
  • ShipmentViral particles are shipped frozen on dry ice. Plasmid DNA (≥ 200ng) will also be included in the shipment.

Viral Production & Use

  • Packaging PlasmidspsPAX2 (plasmid #12260)
  • EnvelopepMD2.G (plasmid #12259)
  • BufferOptiPro
  • Selectable MarkerPuromycin

Biosafety

Requestor is responsible for compliance withtheir institution"s biosafety regulations.Lentivirus is generally considered BSL-2. AAV isgenerally considered BSL-1, but may requireBSL-2 handling depending on the insert.Biosafety Guide

Resource Information

  • Terms and Licenses
    • Terms of Use for Viral Vectors
  • Industry Terms
    • Not Available to Industry

Viral Quality Control

Titering Method:
  • ddPCR assay: 293T cells were transduced with serial dilutions of 141383-LV, harvested several days later, and genomic DNA was isolated. Copies of RRE were measured and normalized to RPP30.
Notes:
  • PCR confirmation of insert: PCR was carried out on the viral preparation with primers targeting the pLenti backbone and the insert. The PCR product was visualized on an agarose gel for size confirmation.

Visit our viral production page for moreinformation.

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公司简介
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北京华迈科生物技术有限责任公司在发布的细菌冻存液供应信息,浏览与细菌冻存液相关的产品或在搜索更多与细菌冻存液相关的内容。 查看更多>
我们实验室一直用一种特简单但非常安全的细胞冻存方法,与大家共享:冻存液:一般用10%DMSO(推荐用sigema原装的,质量好不用预消毒)+10%血清的完全培养基,如果细胞珍贵的话最好用10%DMSO+90%全血清降温方法:用最少两厘米厚的医用棉纱将冻存管紧紧包裹,扎紧,直接放入-70度冰箱,隔夜取出冻存 查看更多>
天津卫凯生物工程有限公司在发布的人骨髓间充质干细胞冻存液供应信息,浏览与人骨髓间充质干细胞冻存液相关的产品或在搜索更多与人骨髓间充质干细胞冻存液相关的内容。 查看更多>
1.何时须更换培养基?视细胞生长密度而定,或遵照细胞株基本资料上之更换时间,按时更换培养基即可。2.如何选用特殊细胞系培养基?培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,首选MEM做粘附细胞培养、 RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。3.可否使用与原先培养条件不同之培养基?不能。每一细胞株均有其 查看更多>
CryoScarless DMSO-Free    无DMSO干细胞冻存液免费领取使用装啦 ... 查看更多>
Cell Freezing Reagents / Solutions Cells! (at least 5 x 106). Foetal calf serum (FCS), heat inactivated at 65 癈 for 1 hr. Dimethylsulfoxide (DMSO). Freezing v 查看更多>
徐州微科曼得生物工程有限公司在发布的VicCyte即用型无血清细胞冻存液供应信息,浏览与VicCyte即用型无血清细胞冻存液相关的产品或在搜索更多与VicCyte即用型无血清细胞冻存液相关的内容。 查看更多>
由于申请名额有限,申请者需下载“无血清快速细胞冻存液0元试用反馈表” ,填写完整相关信息(除实验结果外),并将表单发送至邮箱:sale01@bio-tool.com,才能申请成功。 资料下载:无血清快速细胞冻存液0元试用客户反馈表.docx (下载12次) 领取必拓®无血清快速细胞冻存液(2mL*5支)细则:1.运费:运费由试用申请客户承担,顺丰到付或预付20元,一个月内反馈实验结果,邮费... 查看更多>
Load both sides of the hemacytometer with the cell suspension - covering both counting grids. Count the number of cells in 5 out of 9 squares from each countin 查看更多>
1. 注意事项: 1.1. 欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态,约为80 – 90 % 致密度。 1.2. 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质,例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二 日测试是否有抗体之产生。 1.3. 注意冷冻保护剂之品质。DMSO 应为试剂级等级,无菌且无色 查看更多>
细胞冻存液的原理及配制方法 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂,这两种物质能提 查看更多>
赛业(广州)生物科技有限公司在发布的神经干细胞无蛋白非程序冻存液供应信息,浏览与神经干细胞无蛋白非程序冻存液相关的产品或在搜索更多与神经干细胞无蛋白非程序冻存液相关的内容。 查看更多>
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细胞冻存的方法与步骤 123
央央优耄Iy5M02017-09-29
(一)仪器
1. 净化工作台
2. 离心机
3. 恒温水浴箱
4. 冰箱(4℃、-20℃、-70℃)
5. 倒置相差显微镜
6. 培养箱
7. 液氮冰箱
(二)玻璃器皿
1. 吸管(弯头、直头)
2. 培养瓶
3. 玻璃瓶(250ml、100ml)
4. 废液缸
(三)塑料器皿
1. 吸头
2. 枪头
3. 胶塞
4. 移液管(10ml)
5. 15ml离心管
6. 冻存管(1~2ml)
(四)其他物品
1. 微量加样枪
2. 红血球计数板
3. 记号笔
4. 医用橡皮膏
5. 移液枪
(五)试剂
1. D-Hanks液
2. 小牛血清
3. 培养液
4. 双抗(青霉素、链霉素)
5. 胰蛋白酶(0.08%)
6. 1NHCl
7. 7.4%NaHCO3
8. DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油 (一)细胞冻存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养液;
2. 取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中;
3. 离心1000rpm,5min;
4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml;
5. 将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5 ml;
6. 在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者;
7. 冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。
(二) 细胞复苏
1. 从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,并不时摇动令其尽快融化。
2. 从37℃水浴中取出冻存管,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液,加到离心管并滴加10倍以上培养液,混匀;
3. 离心, 1000rpm,5min;
4. 弃去上清液,加入含10%小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养瓶,37℃培养箱静置培养;
5. 次日更换一次培养液,继续培养。 1.从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存,但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液;
2.将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免冻伤;
3.冻存和复苏最好用新配制的培养液。向左转|向右转
aliquots是什么意思 123
leo20012004-10-15
请教各位大侠,谢谢!!
在冻存前一天最好换一次培养液。
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。除此之外,还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。 细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO),可使溶液冰点降低,加之在缓慢冻结条件下,细胞内水分透出,减少了冰晶形成,从而避免细胞损伤。 采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min,当温度低于-25℃时可加速,到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。
二甲基亚砜是一种重要的渗透型细胞保护剂。在深低温(零下200度)保存细胞时冻存过程中,为防止细胞内液冰晶形成、渗透压改变、细胞结构紊乱等导致的损
伤,有必要使用含有DMSO冷冻保护剂。 DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中,降低冰点、延缓冻存过程, 同时提高细胞内离子浓度,
减少细胞内冰晶的形成,从而减少细胞损伤。深低温时二甲基亚砜的细胞毒性受到抑制。复苏时动作要快,尽快洗掉二甲基亚砜,否则会造成对细胞严重的毒性。二
甲基亚砜(DMSO)是目前最好的细胞冻存保护剂,但也是一种以细胞毒性很大的化学试验剂。研究结果表明,培养液中DMSO浓度为10%时,细胞生长抑制
率近100%;1‰浓度时抑制率为35%,即使是0.04‰的浓度,DMSO对细胞的生长也有不利的影响。
师姐用的晶安生物2ml的,性价比较高,希望可以帮到您。
细胞冻存 123
血刺怪怪482021-08-06
细胞冻存注意事项:
1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态,约为80 – 90 %致密度。
2. 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质,例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。
3. 注意冷冻保护剂之品质,冻存液:10%DMSO+90%FBS,我做细胞试验从不加双抗,NAHCO3-未加
4. 冷冻保存的细胞浓度:
冻存方法
1.冷冻前一日前更换半量或全量培养基,观察细胞生长情形。
2.收集培养之细胞,取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。 离心速度不要大于1000rpm/min或800g/min。
3.离心弃上清,加入适量冷冻保存溶液,使细胞浓度为1-5 x 106 cells/ml,混匀,分装于无菌冻存管中,1 ml/vial,悬浮细胞可以浓一些。
4.冷冻保存方法1: 冷冻管置于4 oC 10 分钟→ -20 oC 30 分钟→ -80 oC 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 长期储存。 或4 oC 1h→ -20 oC 1h→ -80 oC 1h(或隔夜) → 液氮槽vapor phase
最常见的我的k562细胞就是这样做的。
阳离子脂质体法 :稳定转染,瞬时转染,所有细胞使用方法简单,可携带大片段DNA,通用于各种类型的裸露DNA或RNA,能转染各种类型的细胞,没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率,但在体内,能被血清清除,并在肺组织内累积,诱发强烈的抗炎反应,导致高水平的毒性,这在很大程度上限制了其应用。
阳离子聚合物 :稳定转染,瞬时转染,所有细胞。除了具有阳离子脂质体的转染效率高,操作简单,适用范围广,重复性好等特点外,还具有在体内,转染效率高,细胞毒性低等特点,是新一代的转染试剂。
冻存血清与培养时的血清最好一致,保持整个体系的稳定性与持续性,
吹打最好还是用弯头的,用起来更为方便
这个问题由武汉新启迪生物来为您解答。
做ELISA实验,在处理样本前应该先了解收集样本的注意事项。
【标本收集注意事项】
1.收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。
2.血清和血浆避免使用溶血,高血脂标本。
3.标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测,需按一次使用量分装,冻存于-20℃,-80℃电冰箱内,避免反复冻融。
5.可根据标本的实际情况,做适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数) 。
6.收集标本,尽量做到双份的用量,避免一次实验失败,重复实验时标本缺失,从而耽误实验进程。
7.收集标本时,应该做好防护措施(比如戴手套,口罩,护目镜等),认为所有标本都具有一定的潜在危险性。
8.样本处理应该在生物安全柜里面,并且正确使用生物安全柜。

样本正确的处理方法应该是这样的:
【标本处理办法】
1.血清:将采集的全血静置冰箱4℃过夜,然后1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
2.血浆:用EDTA,枸橼酸钠,肝素等作为抗凝剂,加入血液混匀后,1000-3000rpm离
心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)
保存。
3.组织匀浆:切取组织块,0.01MPBS中过洗一次;按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例,在冰水中匀浆。匀浆完成后,5000-10000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
4.细胞培养上清:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
5.尿液,腹水,脑脊液等:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃3-6个月)保存。

注:样品稀释的一般原则
用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。

希望可以给您提供帮助,祝您科研顺利!
使用了可靠有效的保护剂恰当冻存的细胞可永远保存在液氮中而保持活力。至少已证明的历史有30-50年了。不管是在液态液氮中,还是在液氮的气相中,过了几十年细胞活力没有明显下降。
  但在干冰或-70℃冰箱中保存的细胞,活力下降很快,当然细胞与细胞之间敏感性不同。有实验验证保存在-70℃冰箱中的细胞6个月后活力损失超过50%。ATCC证明在干冰中人类细胞4个月活力损失殆尽,小鼠的细胞可到6个月。
1、注意不要放在冷凝器出风口地方,以免阻碍散热。其它地方没什么风险。2、建议实验室低温冰箱一般是用于冻存一些样品,建议周围少放杂物,以免在取样品时,杂物掉落,对实验样品造成影响。

阳离子脂质体转染试剂,保存温度2-8℃,如果放-20℃冻存后还能用吗?对转染效率影响究竟多大。。。

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