Product Name | SMCC Activated R-PE (R-Phycoerythrin) |
Size | 1 mg |
Catalog # | AS-72110 |
US$ | $147 |
R-Phycoerythrin (R-PE), a fluorescent protein from phycobiliprotein family, is isolated from red algae. SMCC Activated R-PE is chemically modified with SMCC. SMCC reacts with the primary amine on R-PE and introduces maleimide groups to R-PE. These maleimide groups easily react with thiol groups of target protein without the need for any additional activation, resulting in convenient conjugation of R-PE with proteins. R-PEs primary absorption peak is at 565 nm with secondary peaks at 496 and 545 nm. The broad excitation spectrum provides the advantage for multi-color immunofluorescent staining or cell sorting. R-PE and the closely related BPE are the most intensely fluorescent phycobiliproteins with orange fluorescence. They are significantly brighter and more photostable than conventional organic fluorophores. R-PE conjugates are widely used in applications such as flow cytometry, live cell staining, and immunofluorescent staining. | |
Detailed Information | DatasheetMaterial Safety Data Sheets (MSDS) |
Storage | 4°C, Do NOT freeze! |
References | Huang B, et al. (2002). The experimental research of R-phycoerythrin subunits on cancer treatment: a new photosensitizer in PDT. Cancer Biother Radiopharm 17, 35-42. Galland-Irmouli AV, et al. (2000). One-step purification of R-phycoerythrin from the red macroalga Palmaria palmata using preparative polyacrylamide gel electrophoresis. J Chromatogr B Biomed Sci Appl 739, 117-23. |
Spectral Properties | Abs/Em = 565/575 nm |
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2.溶氧,在好氧培养过程中,空气是滤过开放的,所以通过摇到可以让更多空气中氧气溶解于发酵液中。
厌氧则不是这个作用了。
3.体系均一,有便于对不同参数的取样测定。
19世纪初,一队拿破仑士兵在指挥官的口令下,迈着威武雄壮、整齐划一的步伐,通过法国昂热市一座大桥。快走到桥中间时,桥梁突然发生强烈的颤动并且最终断裂坍塌,造成许多官兵和市民落入水中丧生。后经调查,造成这次惨剧的罪魁祸首,正是共振!因为大队士兵齐步走时,产生的一种频率正好与大桥的固有频率一致,使桥的振动加强,当它的振幅达到最大限度直至超过桥梁的抗压力时,桥就断裂了。类似的事件还发生在俄国和美国等地。有鉴于此,所以后来许多国家的军队都有这么一条规定:大队人马过桥时,要改齐走为便步走。 对于桥梁来说,不光是大队人马厚重整齐的脚步能使之断裂,那些看似无物的风儿同样也能对之造成威胁。1940年,美国的全长860米的塔柯姆大桥因大风引起的共振而塌毁,尽管当时的风速还不到设计风速限值的1/3,可是因为这座大桥的实际的抗共振强度没有过关,所以导致事故的发生。每年肆虐于沿海各地的热带风暴,也是借助于共振为虎作伥,才会使得房屋和农作物饱受摧残。因为风除了产生沿着风向的一个风向力外,还会对风区的构筑物产生一个横力,而且风在表面的漩涡在一定条件下产生脱落,从而对构筑物产生一个震动。要是风的横力产生的震动频率和构筑物的固定频率相同或者相近时,就会产生风荷载共振。近几十年来,美国及欧洲等国家和地区还发生了许多起高楼因大风造成的共振而剧烈摇摆的事件。
地面共振
当直升机在地面工作时(或滑跑时)受到外界振动后,旋翼桨叶运动偏离平稳位置,如旋翼以后退型摆振运动,这时桨叶重心偏离旋转中心,旋翼重心的离心激振力,激起机身在起落架上的振动;机身振动反馈于旋翼的摆振运动,对旋翼起支持激振的作用,形成一闭环系统,使得旋翼摆振运动越来越大,当旋翼后退型频率与机身在起落架上的某一模型的频率相等或接近时,系统的阻力又不足以消耗它们相互激励的能量,这时整个系统的振动就会是不稳定的,振动幅度(振幅)将越来越大,直到直升机毁坏才告终,即出现了地面共振。
机器损坏
机床运转时,运动部分总会有某种不对称性,从而对机床的其他部件施加周期性作用力引起这些部件的受迫振动,当这种作用力的频率与机床的固有频率接近或相等时,会发生共振,从而影响加工精度,加大机械钢铁的疲劳破坏,加大机械的损害力度。
次声波共振
对人危害程度尤为厉害的是次声波所产生的共振。次声波是一种每秒钟振动很少、人耳听不到的声波。次声波的声波频率很低,一般均在20赫兹以下,波长却很长,不易衰弱。自然界的太阳磁暴、海浪咆哮、雷鸣电闪、气压突变、火山爆发;军事上的原子弹、氢弹爆炸试验,火箭发射、飞机飞行等等,都可以产生次声波。在我们工作、学习和生活的周围,能够产生次声波的小型动力设备很多,如鼓风机、引风机、压气机、真空泵、柴油机、电风扇、车辆发动机等。次声波的这种神奇的功能也引起了军事专家的高度重视,一些国家利用次声波的性质进行次声波武器的研制,已研制出次声波枪和次声波炸弹。不论是次声波枪还是次声波炸弹,都是利用频率为16—17赫兹的次声波,与人体内的某些器官发生共振,使受振者的器官发生变形、位移或出血,从而达到杀伤敌方的目的。现代科学研究已经证明,大量发射的频率为16—17赫兹的次声波会引起人体无法忍受的颤抖,从而产生视觉障碍、定向力障碍、恶心等症状,甚至还会出现可导致死亡的内脏损坏或破裂。这种次声波武器可以说是人类运用共振来危害人类自己的一种技术上的极致。
其它
也是由于共振的力量,巨大的冰川能被“温柔”的海洋波涛给拍裂开。甚至于美国阿拉斯加李杜牙湾经常出现的高达上百米的巨浪,也是由于共振在其中发挥了很大的“推波助澜”的作用。因为共振在这个海湾“作威作福”实在是太厉害了,所以许多航海人对这个海湾都是“敬”而远之。
给人类带来重大伤亡和财产损失的地震,其中亦有共振的“幢幢魔影”:当地壳里的某一板块发生断裂时,产生的波动频率传到地面上,与建筑物产生强烈的共振,于是,就造成了屋毁人亡的惨剧。 持续发出的某种频率的声音会使玻璃杯破碎。高山上的一声大喊,可引起山顶的积雪的共振,顷刻之间造成一场大雪崩。行驶着的汽车,如果轮转周期正好与弹簧的固有节奏同步,所产生的共振就能导致汽车失去控制,从而造成车毁人亡……
人们在生活和生产中会接触到各种振动源,这些振动都可能会对人体产生危害。由科学测试知道人体各部位有不同的固有频率,如眼球的固有频率最大约为60赫兹,颅骨的固有频率最大约为200赫兹等;把人体作为一个整体来看,如水平方向的固有频率约为3—6赫兹,竖直方向的固有频率约为48赫兹。因此,跟振动源十分接近的操作人员,如拖拉机驾驶员,风镐、风铲、电锯、镏钉机的操作工,在工作时应尽量避免这些振动源的频率与人体有关部位的固有频率产生共振。并且,为了保障工人的安全与健康,有关部门己作出了相应规定,要求用手工操作的各类振动机械的频率必须大于20赫兹。 古代
实际上,中国人对于声音共振的运用,还可以追溯到很久远的年代。早在战国初期,当时的人就发明了各种各样的共鸣器,用来侦探敌情。《墨子·备穴》记载了其中的几种:在城墙根下每隔一定距离挖一深坑,坑里埋置一只容量有七八十升的陶瓮,瓮口蒙上皮革,这样,实际上就做成了一个共鸣器。让听觉聪敏的人伏在这个共鸣器上听动静,遇有敌人挖地道攻城的响声,不仅可以发觉,而且根据各瓮瓮声的响度差可以识别来敌的方向和远近。另一种方法是:在同一个深坑里埋设两只蒙上皮革的瓮,两瓮分开一定距离,根据这两瓮的响度差来判别敌人所在的方向。
以上几种方法被历代军事家因袭使用。明代抗倭名将戚继光曾用上面的方法来侦听敌人凿地道的声音。甚至在本世纪的一些现代战争中,不少国家和民族还继续采用这些方法。
我国古时还发明出了另一种更加轻巧、简便、实用的共鸣器。如唐代的军队中就有一种用皮革制成的叫做“空胡鹿”的随军枕,让听觉灵敏和睡觉警醒的战士在宿营时使用,“凡人马行在三十里外,东西南北皆响闻”。当声音通过地面传播到空穴时,在空穴处产生交混回响,于是就能知道敌人的多寡远近。值得一提的是,这种用竹筒听地声的方法正是现代医用听诊器的滥觞。
宋代的科学家沈括就曾巧妙地利用共振原理设计出了在琴弦上跳舞的小人:先把琴或瑟的各弦按平常演奏需要调好,然后剪一些小小的纸人夹在各弦上。当弹动不夹纸人的某一弦线时,凡是和它共振的弦线上的纸人就会随着音乐跳跃舞动。这个发明比西方同类发明要早几个世纪。
据史籍记载,我国晋代就有人对声音共振现象作出了正确的解释,并已经能够完全认识到,防止共振的最好的方法是改变物体的固有频率,使之与外来作用力的频率相差越大越好。
古时还有一个有趣的故事,说的就是人们如何巧妙地消除共振的。唐朝时候,洛阳某寺一僧人房中挂着的一件乐器,经常莫名其妙地自动鸣响,僧人因此惊恐成疾,四处求治无效。他有一个朋友是朝中管音乐的官员,闻讯特去看望他。这时正好听见寺里敲钟声,那件乐器又随之作响。于是朋友说:你的病我可以治好,因为我找到你的病根了。只见朋友找到一把铁锉,在乐器上锉磨几下,乐器便再也不会自动作响了。朋友解释说这件乐器与寺院里的钟声的共振频率相合,于是敲钟时乐器也就会相应地鸣响,把乐器稍微锉去一点,也就改变了它的固有振动频率,它就不再能和寺里的钟声共鸣了。僧人恍然大悟,病也就随着痊愈了。
现代技术
到了现代,随着科技的发展和对共振研究的更加深入,共振在社会和生活中“震荡”得更为频繁和紧密了。
弦乐器中的共鸣箱、无线电中的电谐振等,就是使系统固有频率与驱动力的频率相同,发生共振。电台通过天线发射出短波/长波信号,收音机通过将天线频率调至和电台电波信号相同频率来引起共振。将电台信号放大,以接受电台的信号。电波信号通过天线向空中发射信号,短波通过云层发射,长波通过直接向地球表面发射。收音机的天线将共振磁环的频率调节至和电台电波信号相同时就会产生共振,电波信号将被放大,然后天线将放大后的信号经过过滤后传至喇叭发声。
在建筑工地经常可以看到,建筑工人在浇灌混凝土的墙壁或地板时,为了提高质量,总是一面灌混凝土,一面用振荡器进行震荡,使混凝土之间由于振荡的作用而变得更紧密、更结实。此外,粉碎机、测振仪、电振泵、测速仪等,也都是利用共振现象进行工作的。
进入20世纪以后,微波技术得到长足的发展,使人类的生活进入了一个全新的、更加神奇的领域。而微波技术正是一种把共振运用得非常精妙的技术。微波技术不仅广泛应用在电视、广播和通讯等方面,而且“登堂入室”,与人们的日常生活愈来愈密切相关,微波炉便是家庭应用共振技术的一个最好体现。
具有2500赫兹左右频率的电磁波称为“微波”。食物中水分子的振动频率与微波大致相同,微波炉加热食品时,炉内产生很强的振荡电磁场,使食物中的水分子作受迫振动,发生共振,将电磁辐射能转化为热能,从而使食物的温度迅速升高。微波加热技术是对物体内部的整体加热技术,完全不同于以往的从外部对物体进行加热的方式,是一种极大地提高了加热效率、极为有利于环保的先进技术。
专家研究认为,音乐的频率、节奏和有规律的声波振动,是一种物理能量,而适度的物理能量会引起人体组织细胞发生和谐共振现象,这种声波引起的共振现象,会直接影响人们的脑电波、心率、呼吸节奏等,使细胞体产生轻度共振,使人有一种舒适、安逸感,音律的变化使人的身体有一种充实、流畅的感觉。它活化了体内的细胞,加快了血液的流动,激活了人的物理层次的生命潜能。人们还发现,当人处在优美悦耳的音乐环境中,可以改善精神系统、心血管系统、内分泌系统和消化系统的功能,促使人体分泌一种有利健康的活性物质,提高大脑皮层的兴奋性,振奋人的精神,让人们的心灵得到了陶冶和升华。所以,人们已经开始运用音乐产生的共振,来缓解人们由于各种因素造成的紧张、焦虑、忧郁等不良心理状态,而且还能用于治疗人的一些心理和生理上的疾病。
粒子加速器对于物理学的研究和发展是至关重要的,而粒子加速器对于共振的运用,用“登峰造极”来形容也一点不为过。在粒子物理的基本小宇宙中,每一种能量都有对应的频率,反之亦然,这是很自然的物质互补原理,既有波又有粒子的特性。物质因为具有波的性质,也就有了频率。粒子加速器就是运用了这样的共振原理,把许多小小的“波纹”迭加起来,结果变成很大的“波峰”,可把电子或质子推到近乎光速,在高速的相撞下产生新的粒子来。向左转|向右转
2.溶氧,在好氧培养过程中,空气是滤过开放的,所以通过摇到可以让更多空气中氧气溶解于发酵液中。
厌氧则不是这个作用了。
3.体系均一,有便于对不同参数的取样测定。
HRP分子量较小(40kDa),标记物容易穿透入细胞内部;作用底物为H2O2,以二氨基联苯胺(DAB)为供氢体的反应产物为不溶性的棕色吩嗪衍生物,可用普通光镜观察;在pH3.5~12范围内稳定,对热及有机溶剂的作用亦较稳定,能耐受63℃加热15min;用甲苯与石腊包埋切片处理或用纯乙醇及10%甲醛水溶液固定作冰切片均不影响其活性;溶解性好,100mL缓冲盐溶液中可溶解5gHRP,并可溶解于62%饱和度以下的硫酸铵溶液中,故常用硫酸铵分级沉淀法分离纯化;氰化物、硫化物、氟化物、及叠氮化物等对HRP的活性有抑制作用,应避免使用NaN3作为酶标试剂的防腐剂,以防止失活。
凡能在HRP和H2O2存在时被酶催化H2O2反应而和成有色产物的化合物(供氢体)都可以用显色剂。供氢体的产物分不溶性和可溶性两类。前者最常用的为3,3‘二氨基联苯胺(3,3’diaminobenzidine,DAB),适用于免疫组化法;反应后的氧化型中间体迅速聚合,形成不溶性棕色吩嗪衍生物;这种多聚物还能还原和螯合四氧化饿,形成具有电子密度的产物,适用电镜检查;此外还有饱和联苯胺溶液,氧化后产物呈黄褐色,多用于酶免疫扩散的深沉线显色。后者最常用的为邻苯二胺(O-phenylene diamine,OPD),产物橙色,可溶性、敏感性高,最大吸收值为490nm,可用肉眼判别;易被浓酸终止反应,颜色可数小时不变,是ELISA中最常用的一种;但对光敏感,使用时要避光,并发现有致癌作用。
用HRP标记抗体需借助交联剂的作用,将酶连接在抗体分子上。常用的交联剂为过碘酸钠和戊二醛(glutaraldehyde,CHO-(CH2)3-CHO)。1、改良过碘酸钠法 HRP分子中与酶活性无关的糖基被过碘酸钠氧化为醛基,再与抗体蛋白的氨基形成schiff碱。为了防止酶蛋白的氨基与醛基反应发生自身偶联,在标记前先用2,4-二硝基氟苯(DNFB)封闭酶蛋白中残存的α-和ε-氨基。酶与抗体的结合反应后,再加入硼氢化钠(NaHB4)还原成稳定的结合物。
[标记步骤]
(1)取5mg HRP溶于0.5mL蒸馏水,加入1%2,4而二硝基氟苯(DNFB)无水乙醇溶液0.1mL,室温(20℃±)下轻微搅拌作用1h。
(2)加入1mL 0.06mol/L NaIO4,室温下避光轻搅30min,溶液呈黄绿色。
(3)加入1mL0.16mol/L乙二醇,室温(20℃±)下轻搅作用1 h,终止氧化反应。
(4)加入5mg抗体(Ig),装入透析袋,置0.05mol/L,pH9.6碳酸盐缓冲液(无水碳酸钠1.5g,碳酸氢钠2.93g,蒸馏水加至1 000 mL)1 000 mL中,4℃透析过夜,更换3次。
(5)取出透析袋中液体(约3 mL),加入5mg/mLNaHB4 0.2 mL 4℃ 2h或过夜。
(6)加50%饱和硫酸铵(NH4)2SO4溶液(硫酸铵850g,蒸馏水加至1 000 mL,以30%氨水调pH7.2)6 mL沉淀结合物,置4℃30min后,3 000r/min离心30min,取深沉(SPA不需要进行此步)。
(7)将沉淀物溶于PBS(0.02M pH7.4)中,装入透析袋,并以此缓冲液透析平衡6-12h,换液3次。
(8)在结合物内加入BSA至蛋白浓度为10mg/ mL,或加等量60%甘油,测定工作效价后,小量分装(或冻干,不需加甘油),低温保存备用。2、戊二醛交联法 戊二醛是一种常用的同型双功能交联剂,通过它的两个醛基分别与HRP和抗体蛋白的氨基结合,形成HRP-戊二醛-Ab蛋白结合物。反应可在4-40℃温度范围,pH6.0~8.0 的缓冲溶液中进行,分为一步法和二步法,戊二醛一步法是将酶和待标记抗体混合,同时加入戊二醛进行交联反应。戊二醛二步法是将酶先与戊二醛作用,形成酶-戊二醛结合物,结过透析或层析除去未结合的戊二醛,然后再与抗体结合。
[标记步骤]
(1)取10mgHRP溶于0.2 mL1.25%戊二醛(用0.01mol/L、pH6.8PB将25%戊二醛稀释为1.25%),室温(20℃左右)反应结合18h。
(2)用0.15mol/LNaCl平衡过的Sephadex G-50凝胶柱洗脱,除去游离的戊二醛,或用0.01mol/L,pH7.2PBS,4℃透析过夜。
(3)将5mg抗体IgG溶于1mL0.15mol/L NaCl,再与醛化HRP溶液(10mg/mL)混合。
(4)加入0.1mL 1mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液(调节pH至9.0~9.6),4℃,电磁搅拌下结合24h。
(5)加入0.1mL0.2mol/L赖氨酸(0.29g溶于10mL蒸馏水),4℃放置2h,以封闭残留的醛基,终止反应。
(6)装入透析袋,以0.01mol/L、pH7.2 PBS,4℃透析过夜,或通过Sephadex G-200凝胶柱层析,用PBS洗脱,收集第1峰洗脱液,加入等量60%甘油,测工作效价后,小量分装,4℃或-20℃保存。(二)过氧化物酶编辑本段简介 抗过氧化物复合物制备技术
Stemberger(1970)等,首先报道了过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物(peroxidase-antiperoxidase,PAP)法,此法也称为非标记抗体酶法(unlabelled antibody enzymemethod)。PAP法不需用任何化学交联剂处理酶和抗体,二者活性不受化学反应的影响,可大大提高免疫酶法的灵敏度。标记步骤 (1)取5mL抗HRP血清,16 000r/min 4℃离心20min,取上清液。
(2)加入1mL HRP(2mg/mL)溶液混匀,室温(20℃±)静置1h,16 000r/min,4℃离心20min,取沉淀物。
(3)加冷生理盐水反复洗涤-离心(16 000r/min,4℃离心20min)3次,弃上清,取沉淀物。
(4)加入过量HRP溶液4mL(2mg/mL)混匀后,移至小烧杯内。
(5)在pH计监控下,边搅拌边加入0.1及0.01mol/L HCl调至pH2.4左右,使沉淀完全溶解。
(6)立即加入0.01mol/LnaOH,调pH7.4,16 000r/min,4℃离心20min,取上清液。
(7)加入1/10体积的0.075mol/L醋酸钠和0.15mol/L醋酸铵的等量混合液后混匀。
(8)电磁搅拌下逐滴加入等量饱和硫酸铵溶液,并继续搅拌10min,4℃放置20min,16 000r/min,4℃离心20min,去上清,取深沉物。
(9)以50%饱和硫酸铵洗涤,4℃、16 000r/min×20min,离心2次,取深沉物。
(10)加5mL蒸馏水将深沉物溶解后装入透析袋,用Ph6.75醋酸盐缓冲液(13.5L生理盐水、1.5L蒸馏水、75mL 1.5mol/L醋酸钠及75mL粉酶3moL/L醋酸铵)4℃透析3d,每天换液2次。
(11)17 000r/min,4℃离心20min,取上清液进行工作效价鉴定。
(12)加等量60%甘油,小量分装,-20℃保存。(三)McAb-PAP制备技术编辑本段 用抗HRP McAb制备PAP复合物的工艺条件较为简便,而且不需严格的条件限制。用小鼠抗HRP McAb制备的腹水,按一定的HRP/IgG克分子比混和,置37℃水浴反应2h,即成鼠PAP复合物。以按HRP/IgG克分子比为4︰1制备为宜。(四)碱性磷酸酶标抗体制备技术编辑本段简介 碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP),系小牛肠粘膜和大肠杆菌中提炼出来的一种磷酸酯的水解酶,由多个同功酶组成。从小牛肠粘膜提取的AP分子量为100kDa,酶作用的最适pH为9.6;从大肠杆菌中提取酶分子量为80kDa,最适pH为8.0。它的作用底物较多,常用的酶底物有对硝基本磷酸盐(PNP)、β-甘油磷酸钠、磷酸萘酯等。AP主要用作双标记染色,研究递质共存及酶名疫测定。AP标记抗体,一般采用戊二醛作交联剂一步法,使酶和抗体蛋白的氨基分别与戊二醛的两个醛基结合。标记步骤 (1)取抗体(2~5mg/mL)1mL,加入AP 5mg溶解。
(2)装入透析袋,用0.01mol/L、Ph7.2PBS4℃透析18h,换液3次。
(3)加入2.5%戊二醛20uL,室温(20℃±)放置2h。4℃0.01mol/L、pH7.2PBS透析过夜,换液3次。
(4)移入0.05mol/L、pH8.0Tris-HCl缓冲液中,4℃透析过夜,换液3次。
(5)取出标记抗体,用含%BSA和0.02%NaN3的Tris-HCl缓冲液稀释至4mL,即为酶标记物原液。
(6)加入1/3量纯甘油,测定工作效价后,小量(0.1mL)分装,4℃保存(使用前以pH7.4PBS-吐温溶液将结合物适当稀释)。(五)碱性磷酸酶编辑本段 -抗碱性磷酸酶复合物制备技术
Mason等(1978),用碱性磷酸酶代替过氧化物酶,建立了碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶复合物(APAAP)桥联酶标技术。但以AP作为抗原用常规免疫方法制备的抗血清,很难达到APAPP桥联酶标技术的质量要求,在一定程度上限制了此项技术的推广使用。杨志刚等(1989)利用抗AP的McAb建立了一种制备APAAP复合物的简便方法。只需将AP和抗AP的McAb以适当比例混合,4℃结合过夜即可使用。采用改良的ELISA方法检测APAAP复合中AP的最适含量。具体方法是:用羊抗鼠Ig包被微量滴定板;加入一定量的抗APMcAb;分别加入不同量的AP作用后经过洗涤;加底物显色,测定光密度值(OD)。在一定范围内,APAAP复合物溶液中AP含量增加的同时,相应的OD值也随之增大;当AP增加到一定量时(约6~8mg/mL)、OD值保持稳定。展开
● 振荡和混匀半径:1.5mm(3mm振幅)
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