【求助】细胞裂解液加多少量?
2021-07-29
问题描述:
我是提细胞总蛋白的,6cmdish,我现在是用250ul裂解液的量,可是测出来的蛋白浓度比较低(1ug/ul),提细胞前在显微镜下看了细胞长满了,是不是我的裂解液量加的太多了,应该加多少量比较适合?请教。
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zhangjinbo0661
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【1】哈,可以把裂解液用量调整为50-100微升。【2】加入裂解液后可以加用超声破碎细胞。【3】提完细胞的器具可以在显微镜下看一下,剩余的细胞还多不多。如果还多,说明细胞提取的不彻底,还要改进方法,争取提取的细胞彻底一些。
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zebrafishtom
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一般推荐量是10cmdish/500ul.其他体系根据培养细胞表面积类推.如果细胞特殊,则量还需更改.
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dennistt
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加入裂解液时一般每10^6个细胞加入0.1ml裂解液。是如果此条件下最终提取物蛋白浓度应该不低于5mg/L。一般情况下,可参考下述的使用条件,但细胞数目会因细胞的大小而变动,对于特别大或特别小的细胞,需要自行计数,摸定条件。6孔板的单孔(1~2×10^6细胞),加入0.1~0.2ml;25cm^2培养瓶(3~6×10^6细胞),加入0.3~0.6ml;75cm^2培养瓶(1~2×10^7细胞),加1~2ml。
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maxq301
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1、我的培养瓶是25的,每次用200μg的细胞裂解液,蛋白很浓2、建议用细胞刮刀,冰上裂解
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zhtwll2005
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谢谢大家的帮助!
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寓意
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灰常感激撸主
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