约惠鹏城：ChamQ SYBR qPCR Master Mix (Q31101/02/03)（新型的抗体法热启动DNA聚合酶全新上市，限量样品免费申请试用中！欢迎订购！）

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货号：	RBI2015068
供应商：	润博科仪
规格：	125/500/2,500rxn(20μl)Q311-01/02/03

ChamQSYBRqPCRMasterMix(Q311-01/02/03)（使用SYBR®GreenI嵌合荧光法进行qPCR反应的专用预混液）

订购信息

产品名称规格货号价格（元）
ChamQTMSYBR®qPCRMasterMix 125/500/2,500rxn(20μl) Q311-01/02/03 510/1,650/7,350

产品简介:
本产品是使用SYBR®GreenI嵌合荧光法进行qPCR反应的专用预混液。核心组分ChampagneTMTaqDNAPolymerase为一
种新型的抗体法热启动DNA聚合酶，具有特异性强、检测灵敏度高等诸多优点，配以针对qPCR优化的最适Buffer以及专利特异性促
进因子ExactorTM，非常适合于进行高特异性、高灵敏度的qPCR反应。本产品中含有qPCR反应最适浓度SYBR®GreenI，是一
种2×预混合试剂，可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对靶基因定量准确、重复性好、可信度高。

储存条件:
长期储存应置于-20℃避光，有效期一年；解冻后可于4℃避光短期存放，有效期两周。

常见问题与解决方案:
1).扩增曲线形状异常
a).扩增曲线不光滑：信号太弱，经系统矫正后产生，提高模板浓度重复试验；ROX类型使用错误，确认所用ROX与机型是否匹配。
b).扩增曲线断裂或下滑：模板浓度较高，基线的终点值大于Ct值。减小基线终点(Ct值-4)，重新分析数据。
c).个别扩增曲线突然骤降：反应管内留有气泡。处理样本时要注意离心、进行扩增反应之前要仔细检查反应管内是否有气泡残留。
2).反应结束无扩增曲线出现
a).反应循环数不够：一般设置循环数为40，但需要注意的是过多的循环会增加过多的背景信号，降低数据可信度。
b).确认程序中是否设置了信号采集步骤：两部法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段；三步法扩增程序应当将信号采集设置在72℃延伸阶段。
c).确认引物是否降解：长时间未用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性，以排除其降解的可能性。
d).模板浓度太低：减少稀释度重复试验，一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。
e).模板降解：重新制备模板，重复试验。
3).Ct值出现太晚
a).扩增效率极低：优化反应条件，尝试三步法扩增程序，或者重新设计引物。
b).模板浓度太低：减少稀释度重复试验，一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。
c).模板降解：重新制备模板，重复试验。
d).PCR产物太长：推荐PCR产物长度为80bp-150bp。
e).体系中存在PCR抑制剂：一般为模板带入，加大模板稀释倍数或者重新制备模板重复实验。
4).阴性对照也出现明显扩增
a).反应体系污染：更换新的Mix、水、引物重复试验。反应体系在超净工作台内配制，减少气溶胶污染。
b).引物二聚体的出现：一般在35循环以后阴性对照出现扩增属正常情况，可配合融解曲线进行分析。
5).绝对定量时标准曲线线性关系不佳
a).加样误差：提高模板稀释倍数，提高加样体积。
b).标准品降解：重新制备标准品，重复试验。
c).模板浓度太高：提高模板稀释倍数。
6).融解曲线出现多峰
a).引物设计不优化：根据设计原则设计新的引物。
b).引物浓度太高：适当降低引物浓度。
c).CDNA模板带有基因组污染：重新制备cDNA模板。
7).实验重复性差
a).加样体积失准：使用性能较好的移液枪，扩大反应体积，将模板做高倍稀释，以大体积加入反应体系中。
b).定量PCR仪不同位置温度控制不一致：定期校准仪器。
c).模板浓度太低：模板浓度越低，重复性越差，减少模板稀释度或提高加样体积。

温馨提示：不可用于临床治疗。

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发布于： 2021-07-26 阅读（152）

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