Description
The ExcelRT™ One-Step RT-PCR Kit is designed for the reverse transcription and PCR amplification of a specific target RNA from either total RNA or mRNA. The ExcelRT™ One-Step RT-PCR Kit provides the user an alternative to the lengthy two step processes (first strand generation and amplification) by using a single mixture, single tube, one step reaction. The ExcelRT™ One-Step RT-PCR Kit contains a 2X reaction premix consisting of an optimized buffer, dNTPs, Mg2+ and enzyme stabilizer, and a blend of recombinant reverse transcriptase and Taq DNA polymerase. The ExcelRT™ One-Step RT-PCR Kit allows the user to complete the RT-PCR process using a thermocycler in a single reaction setting. The ExcelRT™ One-Step RT-PCR Kit is capable of detecting even trace amounts of target RNA and ideal for target RNA amplification and analysis
Features
Generates dsDNA directly from RNA samples
High sensitivity and yields
High reproducibility, reduced pipetting errors
High throughput
Reduced RNase H ribonuclease activity
Storage
-20°C for 24 months
Contents
Storage -20°C for 24 months |
High sensitivity and yields
Manual
Manual_RP1100_ExcelRT™ 2X One-Step RT-PCR Kit
SDS
SDS_RP1100
[RP1000] ExcelRT™ Reverse Transcriptase
High yield
Thermostable, up to 50°C, during first strand synthesis
High processivity, generating cDNA up to 8 kb
Reduced RNase H ribonuclease activity
[RI1000] RNAok™ RNase Inhibitor
Application
RT-PCR
cDNA Synthesis
in vitro transcription
[NS1000] FluoroVue™ Nucleic Acid Gel Stain
Excellent for in-gel staining
Sensitivity up to 0.14 ng DNA or 1 ng total RNA
A safer alternative to EtBr
Suitable to blue or UV light
Excellent for in-gel staining
Sensitivity up to 0.14 ng DNA or 1 ng total RNA
A safer alternative to EtBr
Suitable to blue or UV light
[RQ2110] ExcelRT™ 2X One-Step RT-qPCR Kit (TaqMan, ROX)
High yield
Reverse transcription at wide temperature range (42-60°C)
High specificity
Suitable for fast cycle program
With ROX reference dye
ebiomall.com
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检测HIV感染者体液中病毒抗原和抗体的方法,操作方便,易于普及应用,其中抗体检测尤普通。但HIv P24抗原和病毒基因的测定,在HIV感染检测中的地位和重要性也日益受到重视。
抗体检测
抗体检测
血清中HIV抗体是判断HIV感染的间接指标。根据其主要的适用范围,可将现有HIV抗体检测方法分为筛检试验和确证试验。
确证试剂
筛检实验阳性血清的确证最常用的是Western blot(WB),由于该法相对窗口期较长,灵敏度稍差,而且成本高昂,因此只适合作为确证实验。随着第三代和第四代HIV诊断试剂灵敏度的提高,WB已越来越满足不了对其作为确证实验的要求。
FDA批准的另一类筛检确证试剂是-免疫荧光-试验(IFA)。IFA比WB的成本低,而且操作也相对简单,整个过程在1-1.5小时内即可结束。此法的主要缺点是需要昂贵的荧光检测仪和有经验的专业人员来观察评判结果,而且实验结果无法长期保存。现在FDA推荐在向WB不能确定的供血员发布最终结果时以IFA的阴性或阳性为准,但不作为血液合格的标准。
筛检试验
筛检试验主要用于对供血员进行筛查,因此要求操作简便,成本低廉,而且灵敏、特异。2012年,世界上主要的筛检方法仍然是ELISA,还有少数的颗粒凝集试剂和快速ELISA试剂。ELISA有很高的灵敏度和特异性,操作简单,仅需要实验室配备酶标仪和洗板机即可应用,特别适合于试验室大规模筛检使用。
颗粒凝集实验是另一种操作简单方便,成本低廉的检测方法,该方法结果可通过肉眼判定,灵敏度很高,特别适合发展中国家或大量筛选供血员时使用,缺点是必须使用新鲜样品,特异性较差。
80年代后期发展起来的斑点印迹检测(Dot-blot assay)是一种快速ELISA(Rapid ELISA)方法,这种方法操作极为简便,过程短暂,整个过程多数在5-10分钟内甚至3分钟内即可结束,但该法比ELISA和颗粒凝集试剂昂贵得多。
人类免疫缺陷病毒抗体口腔粘膜渗出液检测试剂盒(胶体金法)就属于侧向免疫层析法(金免疫)类别,基于免疫层析技术通过手工操作、肉眼读取结果、20分钟即可定性得出检测结果的快速诊断试剂,用于检测口腔粘膜渗出液样本中的HIV-1型和HIV-2型抗体。可用于自愿咨询检测、不愿采血、晕针患者的初筛。该方法适用于初筛检测,凡由该试剂测定为阳性者,需进行进一步筛查确认。[3]
【HIV阴性】说明从人体内检测不到HIV抗体,阴性符号以(-)表示。不能说没有感染HIV, 要看是什么时候检测的,在窗口期内,感染者的体内还没有产生HIV抗体,或还没有产生足量的HIV抗体,这时HIV检测是阴性结果,如果在窗口期之后检测的,可以排除感染HIV的可能。
【HIV阳性】说明从人体内检测到了HIV抗体,阳性符号以(+)表示。
【检测结果不定因素】
感染还处于窗口期:从HIV进入体内到检测这段时间还不够长,因此血清还没有形成典型的抗体反应
艾滋病进展到终末期,抗体水平下降
其他非病毒蛋白抗体的交叉反应:自身免疫性疾病、某些恶性疾病、怀孕、输血或器官移植等情况下,身体可以产生一些抗体,其反应与HIVP24核心蛋白抗体引起的反应很相似
抗原检测
病原检测主要指用病毒分离培养、电镜形态观察、病毒抗原检测和基因测定等方法从宿主标本中直接检测病毒或病毒基因。由于前两种方法难度大,且需要特殊设备和专业技术人员。因此仅抗原检测和RT-PCR(反转录-PCR)可用于临床诊断。HIV-1P24抗原检测可用于HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断;HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断;第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性,但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断。P24抗原检测一般用ELISA双抗体夹心法试剂,试剂必须经过SDA批准注册、在有效期内,其阳性结果必须依据试剂说明书经中和试验确认。HIV-1P24抗原检测的敏感性为30-90%,该结果仅作为HIV感染的辅助诊断依据,不能据此确诊;HIV-1 P24抗原检测阴性只表示在本试验中无反应,不能排除HIV感染,临床中一般不作为常规诊断项目。
核酸检测
HIV核酸检测可用于HIV感染的辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效判定、预测疾病进展等。常用的HIV病毒载量检测方法包括逆转录PCR实验(RT-PCR)、核酸序列扩增实验(NASBA)、分支DNA杂交实验(bDNA)以及实时荧光定量PCR技术。值得注意的是,每一种HIVRNA定量系统都有其最低检测限,即可以测出的最低拷贝数或国际单位,RNA定量检测时未测出不等于样品中不含有病毒RNA,因此HIV核酸定性检测阴性,只可报告本次实验结果阴性,但不能排除HIV感染;HIV核酸检测阳性,可作为诊断HIV感染的辅助指标,不能单独用于HIV感染的诊断。报告HIV核酸定量检测结果时应按照仪器读数报告结果,注明使用的实验方法、样品种类和样品量,当测定结果小于最低检测限时,应注明最低检测限水平。
HIV核酸定性检测也可用于HIV感染的辅助诊断,在分析HIV基因亚型和变异等基础研究中应用。通常使用PCR或RT-PCR技术,使用分子生物学实验室通用的扩增试剂,引物可来自文献或自行设计,应尽量覆盖所有或常见的毒株,也可使用复合引物。报告定性检测结果时应注明反应条件和所使用的引物序列。此外,利用核酸检测方法的高度敏感性,使用集合核酸扩增检测技术和方法,对高度怀疑感染人群且抗体阴性的样品进行集合核酸检测,可及时发现窗口期感染者。该方法较单份样品的核酸检测具有更高的成本效益。aware天猫
⑴测序是为了验证扩增产物是否为自己的目的产物,既然我的产物长度符合要求,那么有必要进行测序吗?②对于荧光定量检测,我先前的那对引物可以接着用吗?③如用ABI7700采用Taqman探针法检测,探针的设计是自行用软件(如primer5.0)或参考文献提交公司合成(像PCR引物合成)那样吗?④看到有的文章介绍,探针是国外的、国内的,这是什么意思?依我的理解:就像PCR引物合成,只要合成正确,荧光标记完好,国外国内不都一样吗?⑤看到有相应试剂盒提供,其提供的东西有哪几样?是不是探针,引物都包括了,对于那些常见的基因都有相应的试剂盒卖吧,关键是价钱贵吗?
看到一个同事做一课题就是设计荧光定量PCR检测某产物,结果半年也没搞出来,令我感到很生畏。现在还有很多临床病原微生物的荧光定量检测还未成功,有的还需优化,是不是设计较困难,哎呀,还未做,就感到力不从心了,大家帮帮我
比如SNP位点检测试剂盒,一个通道对应一种基因型;
比如病原体定量或突变定性检测,一个通道对应检测靶标,一个通道对应内参信号。
无创DNA检测是准确的。无创DNA产前检测技术仅需采取孕妇静脉血,利用新一代DNA测序技术对母体外周血浆中的游离DNA片段进行测序,并将测序结果进行生物信息分析,可以从中得到胎儿的遗传信息,无创DNA产前检测准确率可达99% 。无创产前基因检测是通过采集孕妇外周血(5ml),提取游离DNA,采用新一代高通量测序技术,结合生物信息分析,得出胎儿患染色体非整倍性疾病(21-三体又称唐氏综合征,18-三体,13-三体)的风险率。
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