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scarabgenomics
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Background

Using synthetic biology methods, the Escherichia coli K-12 genome was reduced by making a series of planned, precise deletions. The multiple-deletion series (MDS™) strains (1), with genome reduction of up to 15%, were designed by identifying non-essential genes and sequences for elimination, including recombinogenic or mobile DNA and cryptic virulence genes, while preserving robust growth on rich and minimal media for either protein or plasmid production. Genome reduction also led to unanticipated beneficial properties, including high electroporation efficiency and accurate propagation of recombinant genes and plasmids that are unstable in other strains. Subsequent deletions and introduction of useful alleles produce strains suitable for many molecular biology applications. MOPS- 3-(N-morpholino) propanesulfonic acid. MOPS (pKa = 7.20) is an excellent buffer for many biological systems at near-neutral pH, MOPS Minimal is designed for culturing E. coli and works very well with our Clean Genome® strains.

Figures

Specifications

Kit Components 10X MOPS, 100mL 0.132M K2PO4, 10mL Quality Control The media is confirmed for growth of Clean Genome® Strains using liquid culture and confirmed aseptic by no growth in liquid media and agar plates. Storage Conditions Store 10X MOPS reagent at -20°C. Store 0.132M K2PO4 at room temperature.

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Support

Product Manuals 10X MOPS Buffer for EZ Rich Defined E. coli Growth Medium Papers

  1. Pósfai G, et al., (2006) Emergent properties of reduced-genome Escherichia coli. Science 312:1044-6.

Patents & Disclaimers

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请问各位前辈们,如果我需要检测小鼠关于免疫方面的指标,是不是就不能用裸鼠造膜,用一般的小鼠就可以了吗?
第一次做WB,两块胶,10%的和8%的,湿转1.5h,然后发展两张膜成了如图所示,好尴尬呀,请问有谁能解答一下问题出在哪里了么?
最近一直跑285KD分子量的蛋白,转膜条件是90V,90min,转完膜之后老是有180kd的Marker留了一点点在胶上,显影的时候285kd的条带就很弱很弱,求高手指点这是怎么回事?
western blot 转移缓冲液的配方? 123
锦瑟华年7252017-11-27

我在网上看到有两种关于转膜缓冲液的配方。第一种是:

10×转缓(储液):30.3gTris,144.1g甘氨酸,调pH到8.3并用去离子水定容至1L,用的时候取100mL,稀释10倍。

另外一种是:

1×转缓(现配现用):3.03gTris,14.4g甘氨酸,200mL甲醇,用去离子水定容至1L,不调pH。

想请教一下各位,这两种配方哪种更好一些?谢谢!



第一次做wb。转膜完发现膜上用丽春红完全染不出条带也没有Marker的带转膜液还混了第二天看底下有白色絮状物但是用的是学姐前几天配的转膜液。配制上应该没有问题看滤纸的边缘有黄色类似条带的颜色是转反了吗?还有查丁香园上还有可能是转过头我们200mA90min这样会转过头吗转完的时候看过膜上是没有任何条带了。
缓冲液将血液转移入50ml离心管定容至45ml;400g室温离心5min后,去除上清;加入红细胞裂解液至45ml,翻转孵育8min;400g离心5min后去上清;重复裂解1次后,加入洗液至45ml,重悬细胞后计数。细胞400g离心5min后,去上清;所得细胞按107白细胞/20ul磁珠比例与Miltenyi磁珠混合,4℃孵育15min;将细胞悬液加入已润湿的LS柱,在强磁场作用下收集未吸附的CD45-细胞组份(含CTC),用3ml洗涤液洗涤柱子,共洗涤3次。所收集的细胞经离心滴加于载玻片上,置于超净台中干燥。加入2%多聚甲醛固定40min,PBS冲洗、晾干,-20℃保存备用。

求助:想用CD206标记抗体,但看说明书写的要破膜表达量才高,没做过破膜标记,请问应该怎么破膜标记抗体,详细步骤是什么?另外,破膜后不会影响细胞活性吗,不会让细胞死掉,流式细胞仪还能检测到吗?

最近在做BDNF的WB,条件一直摸不好,有没有大神分享一下转膜的电流和时间,万分感谢