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目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根过氧化物酶(HRP),底物通常为四甲基联苯胺(TMB)和邻苯二胺(OPD),其在过氧化氢溶液的存在下,经HRP作用,分别氧化为2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和联苯醌。当pH值为5.0左右时,DAB在450nm波长处有最大吸收,当pH值降为L 0时,最大吸收波长移至492 nm,同时摩尔消光系数变大,显色加深,因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。TMB的氧化产物联苯醌在波长450nm处有最大消光系数,如果HRP量少,H:O:和TMB过量时,则形成蓝色的阳离子根。降低pH,即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌,使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min.因此,450nm和492 nm两个波长是目前ELISA测定最常用的。各种酶标仪都配有放置滤光片的可自动转换的部件,可以同时安装6~8片滤光片,所配备的滤光片均应包括上述两个波长,有的酶标仪以490nm滤光片替代492nm滤光片,影响不大一般酶标仪的测定波长在400~750nm或800nm之间,完全可以满足ELISA的显色测定。。除了这两个基本滤光片外,考虑到双波长比色的需要,还应有620nm或630nm或650nm和405nm波长的滤光片,其他滤光片可根据自己的需要选择。有时,有的实验室希望用酶标仪作微量生化测定,故酶标仪生产厂家对其生产的酶标仪扩展了紫外检测功能,此时需要一个340nm波长滤光片。此时,酶标仪的测定波长范围就成为340-750nm或800nm。
酶标仪有单波长和双波长检测功能有时使用者不知在什么情况下使用单或双波长检测。所谓的“单波长”就是使用一种对显色具最大吸收的波长即450 nm或492 nm进行比色测定;而“双波长”则除了用对显色具最大吸收的波长即450 nm或492 nm进行比色测定外,同时用对特异显色不敏感的波长如630 nm进行测定,酶标仪最后打印出来的吸光度则为二者之差。630 nm波长下得到的吸光度是非特异的,来自于板子上诸如指纹、灰尘、脏物等所致的吸收。因此,在ELISA比色测定中,最好使用双波长,且不必设空白孔。
酶标仪是一种用途广泛的生物检验医疗设备,利用酶联免疫分析法,根据酶标记原理,根据呈色物的有、无和呈色深浅进行定性或定量分析。
这是一种极具生命力的免疫学技术。
可用于单克隆抗体筛分、凝血分、抗生素灵敏度检验,以及其它需要进行比色的分析工作中。
该仪器适用于临床检验、微生物学、流行病学、免疫学、内分泌学以及农林科学等领域。
广泛用于医院、血站、防疫站、生物制品等部门。
国卫生行政主管部门已明确规定,对多发常见的肝炎病诊断,不能用目测进行,必须用酶标仪判断。
没有酶标仪或不用酶标仪的医院不能上等级,也没有判断肝炎的资格和权利。
对于有蔓延趋势的艾滋病毒的判断,必须建立专门的艾滋病实验室并采用酶标仪进行判断。
分类
酶标仪是实验室常用的一种仪器,一般可以按照滤光方式的不同和功能的不同进行划分。
一。
按照功能的划分,酶标仪可以分为光吸收酶标仪,荧光酶标仪,化学发光酶标仪和多功能的酶标仪。
光吸收酶标仪是用来进行可见光与紫外光吸光度的检测。
特定波长的光通过微孔板中的样品后,光能量被吸收,而被吸收的光能量与样品的浓度呈一定的比例关系,由此可以用来定性和定量的检测。
光吸收的检测技术成熟,成本低,操作简单,但是动态范围窄,灵敏度比较低,特异性不强。
一般可见光和紫外光分别采用钨灯及氘灯作为光源,而紫外/可见酶标仪是可以将两种光源进行切换,适应不同测量波长的需求。
荧光酶标仪是用来进行荧光的检测。
通过激发光栅分光后的特定波长的光照射到被荧光物质标定的样品上后,会发出波长更长的发射光,通过发射光栅后到达检测器。
荧光的强度与样品的浓度呈一定的比例。
荧光检测灵敏度高,可实时检测,使用方便,检测模式多样,但是容易受外界干扰,激发光与发射光容易互相影响,干扰检测。
化学发光是来自生物化学反应中的自发光,可分为辉光型和闪光型两种类型。
辉光型发光持久,稳定,能持续一段时间;
闪光型发光时间短,变化快,稳定性不强,需要应用自动加样器才可以进行。
化学发光中发出的光子数与样品量呈一定比例关系,化学发光酶标仪灵敏度非常高,动力学范围广。
多功能酶标仪是以上三种酶标仪的集合,比如BioTek的Synergy H1/H4,它集成了两种或者三种酶标仪于一体,可以同时进行光吸收,荧光和化学发光的检测,功能强大,使用范围广,可作为研究平台,避免了重复购买,是实验室的首选。
二。
酶标仪基于滤光方式的不同可分为滤光片式的酶标仪和光栅式酶标仪。
滤光片式酶标仪采用滤光片来进行波长的选择,酶标仪内置滤光片轮,可选择试验所需的不同波长的滤光片来进行分光,光源发出的全波谱光经过滤光片后,大部分被过滤,只剩下滤光片本身允许的波长通过,这样就可就通过滤光片来获得特定的波长。
滤光片轮一般包含4-6块滤光片,通过选择不同的滤光片可获得不同的波长,但是获得的波长都是固定的,受到一定的限制,不能获得任意所需的波长,而且更换滤光片价格比较昂贵。
一般波长固定的滤光片有405,450,490,630nm。
光栅式酶标仪虽然才出现短短十余年,但是发展非常迅猛,现在已经是主流的酶标仪。
比如BioTek的Synergy Mx/H1m,它采用光栅进行分光,光源发出的全波谱光线经过光栅后,通过光栅上面分布的一系列狭缝的分光,就可以获得任意波长的光,波长连续可调,一般递增量为1nm, 同时具有带宽可选的功能。
光栅式酶标仪使用方便灵活,可以通过软件选择任意波长的光,而且可以进行全波长的扫描,通过全波长扫描可以获得未知样品的吸收峰,从而可以达到检测未知样品的目的,在实验室中很受欢迎,可以进行更多实验的检测。
因此目前在国内的普及程度很高。
另外根据通道的个数,可以将酶标仪分为单通道和多通道两种类型,单通道又有自动和手动两种之分。
1、Hybrid 技术:高灵敏度的基于滤光片系统的检测,灵活的基于光栅的检测。
2、检测模式:荧光强度检测(FI), 荧光偏振检测(FP), 时间分辨荧光检测(TRF), TR-FRET, 高性能发光检测, 紫外/可见吸收光, AlphaScreen / AlphaLISA。
3、兼容 Take3™ 微量检测板 可进行体积为2 μL 的微量样品的检测
4、四光栅系统及带宽可调: Synergy H4 的光路整合了两个双光栅单色器. 这种四光栅设计. 可变的带宽设计极大的增加了检测的灵活性。
5、深度阻挡滤光片和二向色镜: Synergy H4的滤光片/二向色镜组合为,荧光强度、时间分辨荧光、荧光偏振及AlphaScreen / AlphaLISA 均具有最好的检测性能.向左转|向右转
因为之前一直在找这个软件,很久都没找到,终于在丁香上看到有人共享出来了,嘿嘿,,,,,
高兴的安装完了,Eee..........没序列号,没办法,又找了N多天所有能上的网站都上了都没有。
又想到可以**试,又开始学**,嘿嘿,断断续续的学,一个多月过去终于成功了,不容易啊
现在共享给大家。
【酶标仪是国家规定的强制计量检定仪器】根据《中华人民共和国计量法》第九条之规定,县级以上人民政府计量行政部门对社会公用计量标准器具,部门和企业,事业单位使用的最高计量标准器具,以及用于贸易结算,安全防护,医疗卫生,环境检测方面列入强制检定目录的工作计量器具进行强制检定。
首先,酶标仪是用于医疗卫生方面的,其次,酶标仪实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。比色计是被列入强制检定目录的,因此需要强制检定。
【酶标仪】即酶联免疫检测仪,是酶联免疫吸附试验的专用仪器,又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动2大类,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。 测定一般要求测试液的最终体积在250μL以下,用一般光电比色计无法完成测试,因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。
(l)盛装待测比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的 聚乙烯材料制成,对抗原抗体有较强的吸附作用,故用它作为固相载体. (2)由于盛样本的塑料微孔板是多排多孔的,光线只能垂直穿过,因此酶标仪的光来都 是垂直通过待测溶
求助,请问各位老师,我用日本同仁的cck-8来做细胞毒性实验,96孔板是康宁的白色板,
酶标仪是
伯乐的imark,490nm下测吸光度。可是读出的所有数据都是****,包括空的孔。这是为什么呢?是这种96孔板不能直接放入酶标仪中检测吗,还是仪器的问题,还请知道的老师指点一下,急,谢谢谢谢
thermo 酶标仪国际三大品牌 TECAN PEMD
酶标仪可以检测哪些项目?可能良多,病院仿佛也在用,但我只问关于食物方面的检测项目<aapporig="69760"target="_blank"onclick="javascript:returnredirectWrapped(this);"class="thirdAppLink"href="http://bbs.foodn.cn/forum.php?mod=redirect
brdu标记一般检测细胞的。酶标仪属于酶免试验检测传染病,给出判读结果的仪器,读出结果阳性或者阴性。现在的小可以手工做实验,买一台洗板机和一台Hebe酶标仪,成本低。大一般使用有专利的Uranus AE全自动酶免仪。