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Ex/Em(nm) | None/None |
MW | N/A |
CAS# | N/A |
Solvent | N/A |
Storage | |
Category | MicroBIOLOGy FluorescenceImaging |
Related | BiochemicalAssays |
1.ProteinPrecipitation:
1.1 Prepareaclearsolutionsamplewithproteinconcentrationlessthan50mg/mLafterhomogenizationandcentrifugation.Keepproteinsamplesonice.
Note:Highproteinconcentrationsamplesmightneedtobediluted.
1.2 Add10μLofcoldTCA(ComponentA)into100μLofproteinsampleandvortexbrieflytomixwell.
1.3 Keepthesampleonicefor10minutes.Centrifugeat12,000rpmfor5minutes.Transfersupernatant(deproteinizedsample)toanothertube.
Note:ItisrecommendedtoneutralizesamplesinTCA(Step2.1)anduseforrelevantassaysimmediately.However,deproteinizedsamplesinTCAmaybestoredat-70ºCforuptoonemonth.
2.TCANeutralization:
2.1 ToneutralizeexcessTCA,add10μLofcoldNeutralizationSolution(ComponentB)intothecollectedsupernatantandvortexbrieflytomixwell.
2.2 Keepthesamplesonicefor5minutes.Samplesarenowdeproteinizedandneutralized.
2.3 (Optional)Readabsorbanceat280nm(OD)tocheckifthesamplesaredeproteinized.
References&Citations | PrinterFriendlyVersion |
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AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司,前身为ABD Bioquest,总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年,一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术,综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究,引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络,为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。
美国AATBioquestInc.(前身是ABDBioquest,Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域,包括吸收(颜色),荧光和发光技术。AATBioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学,免疫学,细胞生物学和分子生物学等领域。AATBioquest会不断介绍新产品,快速的丰富各个领域的产品。
1)我们提供反应荧光探针和发光探针,生物素和端粒酶能够应用于标记药物小分子和生物聚合物,如蛋白、核酸以及其他碳水化合物;2)我们研究并生产荧光和发光探针用于检测蛋白,核酸和活细胞。3)我们不断的推出新型的荧光和发光探针用于检测多种酶,特别是检测水解酶和氧化还原酶类;4)我们致力于开发用于信号转导研究的试剂;5)我们提供生理和神经探针,特别是钙离子指示剂和膜电位探针。
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AATBioquest,Inc.(formerlyABDBioquest,Inc.)develops,manufacturesandmarketsbioanalyticalresearchreagentsandkitstoscientistsengagedinlifesciencesresearch,diagnosticR&Danddrugdiscovery.Wespecializeintheareaofphotometricdetectionsincludingabsorption(color),fluorescenceandluminescencetechnologies.TheCompany"sproductsenablescientistsandbiomedicalresearcherstobetterunderstandbiochemistry,immunology,cellBIOLOGyandmolecularbiology.AATBioquestconstantlyintroducesnewproducts,andoffersarapidlyexpandinglistofproductsthataregroupedintoseveralproductlines.
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前一阵子实验室开始使用一种新的核酸染料-goldview,取代原先用的溴化乙锭-EB.goldview现在是由赛百盛出售.以下摘自官方网站:
GoldViewTM核酸染料——使用说明
概述
GoldViewTM是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,采用琼脂糖电泳检测DNA时,GoldViewTM与核酸结合后能产生很强的荧光信号,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,而单链DNA呈红色荧光。GoldView不仅能染DNA,也可用于染RNA。
通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验,致突变性结果均为阴性;而溴化乙锭(EB)是一种强致癌剂。因此用GoldviewTM代替EB不失为一种明智的选择。
使用方法
1.将100ml琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8%~2%)在微波炉中融化。
2.加入5µlGoldView,轻轻摇匀,避免产生气泡。
3.冷却至不烫手时倒胶,待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。
4.电泳完毕在紫外灯下观察。若使用数码相机照像记录,则关闭相机的闪光灯,放在自动档即可;若使用凝胶成像系统照相,通过调节光圈、曝光时间,选择合适的滤光片,可得到成像清晰、背景较低的照片。
注意事项
1.胶厚度不宜超过0.5cm,胶太厚会影响检测的灵敏度。
2.加入GoldView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响,但不明显。
3.通过凝胶电泳回收DNA片段时,建议使用GoldView染色,在自然光下切割DNA条带,避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤,可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。
4.虽然未发现GoldView有致癌作用,但对皮肤、眼睛会有一定的刺激,操作时应戴上手套。
电泳结果显示GV灵敏度与EB相当
问题1.Goldview到底是不是丫啶橙?
2.赛百盛不公布其成分的原因是害怕其为丫啶橙还是出于技术保密?
而且样品中的无水硫酸钠未变色,而做标准曲线的五个和空白对照的变为蓝色了,请高手指教,多谢!
还有,是否变蓝对测定结果有影响吗?
谢了哈
欢迎你!请下次规范发贴:)
1、快讯上是Invotrogen公司的SYRBGOLD,不过500ul/1390元,实在有点贵,为了查用量;
2、结果又查出赛百盛的GoldViewTMDNA染料1ml/100元;
3、还有一种在日光下即可看出DNA条带的上海华舜生物工程有限公司的LightBluedye;
为了一个EB,居然不小心查出三种染料,而对这三种染料的评价也褒贬不一,我个人希望找个毒害小些,而且灵敏度还不能低于EB,价格方面也能让老板接受的来。
而对这三个染料,我有三个问题:
1、SYRBGOLD的用量问题,500ul能用到200次吗(我一般一次用30ml的胶,配在胶中)?
2、GoldViewTMDNA染料的成分是否如有些人所说的就是丫啶橙(能举出确切证据吗)?
3、LightBluedye灵敏度如何?能比得过EB吗?
产品主要应用:点击化学(Clickchemistry)、蛋白质组学研究中的双向荧光差异凝胶电泳(2DDIGE)和实时荧光定量PCR(RealtimePCR)。
氨基类染料是包含自由氨基的活性染料,染料可与活化羧酸衍生物和其他亲电子的试剂结合。比如:氨基与EDC-活化的羧基结合。
相关产品如下:
中文名英文名产品编号分子结构Cy7.5胺Cy7.5amineAGF1350A[img]/KindEditor_4.0.1/attached/image/20130704/20130704110804_5250.jpg[/img]Cy5胺Cy5amineAGF1332A[img]/KindEditor_4.0.1/attached/image/20130704/20130704110715_7750.jpg[/img]相似系列产品:
抗体、核酸、蛋白质等生物分子标记染料
羰基活性荧光染料
巯基反应性染料
羧酸类染料
健那绿染液是一种活体染液,实验对象必须是活细胞,健那绿可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色,而细胞质接近无色。
健那绿——高中唯一一个活体染色剂。染线粒体的,染成蓝绿色
产品主要应用:点击化学(Clickchemistry)、蛋白质组学研究中的双向荧光差异凝胶电泳(2DDIGE)和实时荧光定量PCR(RealtimePCR)。
菁染料是性能优良的荧光标记染料,摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的。N-羟基琥珀酰亚胺酯是最常用的脂肪氨基标记试剂,广泛用于蛋白质、氨基酸多肽、抗体、核酸及其他生物分子的标记和检测。通过改变次甲基链的长度,可改变其荧光发射波长,每增加一个双键,按照Huoffman规则正好红移约100nm。
菁染料Cy3和Cy5已成为基因芯片的首选荧光标记物;另外,Cy5,Cy5.5和Cy7,Cy7.5的吸收在近红外区背景非常低,是荧光强度最高、最稳定的长波长染料,特别适合于活体小动物体内成像。但由于菁染料,尤其是不对称菁染料的合成副反应多,副产物极性相近,产物的分离提纯相当困难。菁染料特别是水溶性菁染料分子极性大,分离提纯越加困难。Lumiprobe供应脂溶性和水溶性菁染料。
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