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AG Scientific/PMSF (Phenylmethylsulfonyl fluoride)/5 g/P-2401-5 g
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Alternate Name/Synonyms
Phenylmethylsulfonyl fluoride; Benzylsulfonyl fluoride
SKU
P-2401
CAS #
329-98-6
Chemical Name
Phenylmethanesulfonyl fluoride
Chemical Formula
C7H7FO2S
Molecular Weight
174.2 Da
Appearance
White fine needles/crystalline powder
Purity
≥98.5 %
Solubility
Soluble in 10% pure ethanol, chloroform and diethyl ether. Clear, colorless solution in chloroform and diethyl ether.
Stability
PMSF has limited water solubility, it must be dissolved in a small amount of solvent, such as ethanol.
Melting Point
93.8°C
Preparation
Dissolve PMSF in isopropanol at 1.74 mg/mL (10 mM); store in aliquots at -20°C
Storage Temp
4°C, desiccated
THERAPEUTIC AREA
Analgesic
USE
PMSF inhibits serine proteases such as trypsin and chymotrypsin. Also inhibits cysteine proteases (reversible by reduced thiols) and mammalian acetylcholinesterase. It has been used in following applications; cell fractionation, a supplement in nuclear protein extraction, inhibitor of cholesterol esterase (CE) and pseudocholinesterase (PCE) and for the collection of blood prior to centrifugation to quantify plasma ANP levels.
Merck Index
N/A
MDL NUMBER
MFCD00007424
CHEMACX
X1032413-5
INCHI
InChI=1S/C7H7FO2S/c8-11(9,10)6-7-4-2-1-3-5-7/h1-5H,6H2
SMILES
c1ccc(cc1)CS(=O)(=O)F
Peptide sequence
Not Applicable
RTECS
XT8040000
UN #"S
UN 2928
PACKING GROUP
II
HAZARD CLASS
Not Applicable
Handling
Use only in area provided with appropriate exhaust ventilation. Keep away from heat and source of ignition. Empty containers pose a fire risk, evaporate residue under fume hood. Ground all equipment containing material. Do not breathe dust.
msds 1
P-2401, PMSF, SDS, diamond format.pdf
Certificate of Analysis 1
P-2401, H1328C.pdf
Certificate of Analysis 2
P-2401, H1328B.pdf
Certificate of Analysis 3
P-2401, H1328A.pdf
AGScientific,Inc.成立于1997年，专注于创新生化制剂以及用于诊断测试开发的定制原材料，以推进临床前研究药物开发。产品涉及抗生素，生物洗涤剂，缓冲液，诊断，酶，医疗设备试剂，蛋白酶K，还原剂，RNaseA等。
CHAPS是一种两性离子洗涤剂，广泛应用于蛋白质纯化过程。作为这类洗涤剂的一部分，CHAPS含有一个正电荷和一个负电荷，但没有一个净的总电荷。CHAPS的生物膜亲和力相对较低，但在特定的浓度范围内可以有效地诱导溶血和蛋白溶解。CHAPS被归类为一种临界胶束浓度为6-10mM的非变性表面活性剂。
CHAPS的应用：在实验室中，CHAPS和其他两性离子洗涤剂可用于在分离蛋白之前诱导细胞裂解。它也可以用作二维凝胶电泳过程中的缓冲液，在某些情况下，它比SDS等阴离子洗涤剂更受欢迎。在蛋白质分析之前，可以通过透析从溶液中去除CHAPS。另一种技术利用专门的树脂和旋转柱也可以用来有效地去除皲裂用于监测化学反应或蛋白质结合的紫外/可见光谱学•用于离子交换色谱和等电色谱•用于细胞的膜渗透•以酶特性作为变性缓冲液的成分
嘌呤霉素盐酸盐是从阿氏链霉菌中分离得到的氨基糖苷类抗生素。嘌呤霉素是一种蛋白质合成抑制剂，它将自己整合到一个正在生长的多肽链中，导致其提前终止。嘌呤霉素的主要应用是作为基因选择抗生素，在CRISPR/Cas9基因编辑中发挥重要作用。这种以盐酸盐形式存在的嘌呤霉素试剂具有抗肿瘤、抗锥虫和抗菌的特性。重要的是要将嘌呤霉素盐酸盐储存在一个密闭的容器中，并置于通风干燥的地方。
盐酸贝斯他汀是氨基肽酶，氨基肽酶B，氨基肽酶M(CD13)，和链霉菌来源的亮氨酸氨基肽酶(LAP3)的一种金属蛋白酶抑制剂。这些蛋白的抑制作用是由于肿瘤细胞的凋亡诱导。Bestatin在抗癌化疗、免疫调节、镇痛等方面表现出良好的疗效。
蛋白酶K(又称内肽酶K)是一种从真菌Tritirachiumalbumlimber培养滤液中分离出的胞外内肽酶。这种独特的真菌可以降解角蛋白(因此蛋白酶“K”)，并可以利用其副产品作为碳和氮的唯一来源来生长。该酶在较宽的温度和pH范围内是稳定的，在55-65℃和pH8.0时是最佳活性。它在高盐浓度下也很稳定，在强洗涤剂如SDS的存在下也很活跃。其分子量为28.5kDa，对其多肽靶点的特异性较低。
AG蛋白酶K应用于下一代测序(NGS)和微阵列技术•核酸纯化，当从酵母、细菌、哺乳动物细胞和植物细胞裂解物中提取DNA和RNA时，通过灭活核酸酶来纯化核酸•提高PCR产物的克隆效率•使用加速器质谱法对DNA加合物水平进行定量的样品准备•核糖核酸酶保护试验中鸡尾酒酶的失活•添加到提取程序，以优化微阵列研究的原始乳腺肿瘤的RNA产量应用于蛋白质•检测具有独特抗蛋白降解能力的牛海绵状脑病蛋白。•组织消解作为另一种样品制备方法，用于液相色谱-串联质谱定量分析•特异性修饰细胞表面蛋白，分析膜结构进行蛋白定位•生成用于功能研究表征的蛋白片段
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2021-09-15
一、实验目的学习RNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术。二、实验原理RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中，可以分离混合物中不同分子量的RNA分子，凡是无法确定分子量。只有在变性情况下，RNA分子完全伸展，其泳动率才与分子量成正比。判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。完整的未降解的RNA制品的电泳图谱应可清晰看到18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA的三条带，且28s rRNA的亮度应为18s rR 查看更多
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2016-01-11
苏州盖德精细材料有限公司在发布的琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒供应信息，浏览与琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒相关的产品或在搜索更多与琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒相关的内容。 查看更多
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2021-08-17
Protein G 是链球菌（group C 和 G）细胞表面蛋白。它与Protein A类似，通过与免疫球蛋白的Fc区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG，但两者结合特异性有所不同。Protein G 对人 IgG3, 小鼠 IgG1, 大鼠 IgG2a等具有高亲和力。天然Protein G具有白蛋白和细胞表面结合域。重组Protein G去除了白蛋白和细胞表面结合域，以减少非特异性结合。该蛋白与Sepharose偶联后可用于从血清或腹水中纯化总IgG。 查看更多
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2021-07-23
产品名称： Agarose, Low melting 低熔点琼脂糖
包装： 5g
产品类别： F-生化试剂类
CAS#： [9012-36-6]
级别： 生物技术
储存条件： 18~25℃
产品属性： Gel strength (1.5%) >480g/cm2
mp: 62~68℃
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2021-09-17
南京赛泓瑞生物科技有限公司是专业从事生化试剂、分子生物学试剂、实验耗材及实验仪器研发、销售、服务为一体的专业性生物科技公司。 为了答谢各位奋斗在科研的老师长期对本公司产品的关注，对下列优势产品进行促销，满2000元还有礼品相送哦，小伙伴们赶快行动吧。 更多促销信息请关注官方微信和微博： 扫一扫加微博 扫一扫加 微信 订购热线：025-87139386 15195893056 ... 查看更多
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2021-08-02
Form: Powder
Product Size: 100 g
Melting Point: Low Melting Point
Separation Range: >1,000 bp
Gel Compatibility: Agarose Gels
Validated Application: Plaque Assays,
Gel Electrophoresis
Green Features: Sustainable packaging
Regulatory Statem 查看更多
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2015-05-21
实验原理限制性内切酶切割后的DNA片断经过电泳后，按分子量大小被分开，排列在琼脂糖凝胶中，可以将特定的某条DNA带所在的凝胶切下来，加热或用特殊的试剂熔解凝胶，使DNA溶回到溶液中，再经过乙醇沉淀或过柱即可获得目的 DNA酶切片段。实验试剂1. 电泳缓冲液2. 荧光染料3. 电泳级琼脂糖粉4. 10′加样缓冲液5. DNA分子量标准(DL2000)6. DNA凝胶回收试剂盒实验设备1. 旋涡混合器2. 微量移液取样器3. 移液器吸头4. 查看更多
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2015-11-24
凝胶成像分析系统：可以应用在蛋白电泳凝胶，DNA凝胶，样品进行图象采集并进行定性和定量分析，样品包括：EB、SYBR Green、SYBR Gold、Texas Red、GelStar、Fluoroscecin、 Radiant Red等染色的核酸监测；以及Coomassie Blue、SYPRO Orange、各种染色的蛋白质凝胶如考染等。（或UV,EB和有色及可见样品成像）
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2021-09-01
技术参数
10 × Loading Buffer 1 ml × 10 支
SDS 0.90%
Glycerol 50%
Bromophenol Blue 0.05%
产品描述
用于琼脂糖凝胶电泳的Loading Buffer。本制品与Takara常规限制酶中附带的10×Loading buffer组成相同。
保存:室温。
应用:琼脂糖凝胶凝胶电泳。
使用说明
向酶促反应液中加入多于1/10体积量的本制品，即可终止反应，此溶液可直接用于琼脂糖凝胶电泳。室温保存时， 查看更多
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2021-09-15
l、去除DNA样品中的杂质 琼脂糖是从琼脂中提取出来的，其中吉有较多的酸根和羟基多糖。目前大多数级别的璩脂糖中混有硫酸酯多糖，这种物质能抑制基因克隆中使用的多种工具酶的活性，如DNA限制性内切酶、连接酶、激酶及聚合酶。在回收DNA时应尽量减少这些酶抑制剂的污染。不管用哪种方法，回收DNA片段的溶液，要用2.5mol/L醋酸铵和乙醇沉淀再用7。q.乙醇漂洗数次，这样处理，可以很有被地去除一些有害的有机分子和无机盐沉淀。已筏列 查看更多
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2015-12-12
天然琼脂（agar）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（agarose，约占80%）及琼脂胶（agaropectin）组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响... 查看更多
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2015-12-12
天然琼脂（agar）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（agarose，约占80%）及琼脂胶（agaropectin）组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响... 查看更多
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琼脂糖(Agarose)的特性知多少 实验方法123
链仪胀魏2021-07-29
琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解，温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶，这是它具有多种用途的主要特征和基础。琼脂糖凝胶性能通常用凝胶强度表示。强度越高，凝胶性能越好。质量较好的琼脂糖强度通常在1200克/cm2以上（1%胶浓度）。琼脂糖的凝胶性是由存在的氢键所致，凡是能破坏氢键的因素都能导致凝胶性的破坏。琼脂糖具有亲水性，并几乎完全不存在带电基团，对敏感的生物大分子极少引起变性和吸附，是理想的惰性载体。在琼脂糖制备过程中需要把琼脂果胶尽量去除，否则琼脂糖有可能存在极微量硫酸根和丙酮酸取代电离基团，就会造成电内渗（EEO），电内渗对质点的移动产生影响。质量较好的琼脂糖硫酸根含量比较低，通常在0.2%以下，电内渗比较小，通常在0.13以下。这也就是琼脂糖比琼脂贵那么多的原因了。
1937年荒木第一次从琼脂中分离出琼脂糖，但直到1961年Hjertin首先发现了琼脂糖优异的使用性能后才引起了越来越多的关注，并开始工业生产。琼脂糖广泛应用于临床化验、生化分析和生物大分子物质的分离等领域。
1937年荒木第一次从琼脂中分离出琼脂糖，但直到1961年Hjertin首先发现了琼脂糖优异的使用性能后才引起了越来越多的关注，并开始工业生产。琼脂糖广泛应用于临床化验、生化分析和生物大分子物质的分离等领域。
在琼脂糖凝胶中回收DNA中,为什么碘化钠能融化琼脂糖– 960化工...123
双面伊人19902017-10-02
作为盐，它可以液化凝胶。凝胶都是氢键盐键等次级键交联成的，会被离液序列高的盐破坏掉，加盐酸胍也能起到这个作用，不一定是碘化钠。
其实加入碘化钠最主要的作用是高离序盐，让DNA和它结合以后和柱子里的凝胶充分充分地，结合起来！！
洗涤那步很重要，如果洗不干净高离序盐，会抑制酶切，有些酶很敏感的。
其实加入碘化钠最主要的作用是高离序盐，让DNA和它结合以后和柱子里的凝胶充分充分地，结合起来！！
洗涤那步很重要，如果洗不干净高离序盐，会抑制酶切，有些酶很敏感的。
琼脂糖凝胶电泳实验报告 123
奇酷2492017-10-03
琼脂糖是线性的多聚物，基本结构是1,3连结的β-D-半乳糖和1,4连结的3,6-内醚-L-半乳糖交替连接起来的长链。琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解，温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶，这是它具有多种用途的主要特征和基础。琼脂糖凝胶性能通常用凝胶强度表示。强度越高，凝胶性能越好。
琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解，温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶，这是它具有多种用途的主要特征和基础。琼脂糖凝胶性能通常用凝胶强度表示。强度越高，凝胶性能越好。质量较好的琼脂糖强度通常在1200克/cm2以上（1%胶浓度）。
琼脂糖的凝胶性是由存在的氢键所致，凡是能破坏氢键的因素都能导致凝胶性的破坏。琼脂糖具有亲水性，并几乎完全不存在带电基团，对敏感的生物大分子极少引起变性和吸附，是理想的惰性载体。在琼脂糖制备过程中需要把琼脂果胶尽量去除，否则琼脂糖有可能存在极微量硫酸根和丙酮酸取代电离基团，就会造成电内渗（EEO），电内渗对质点的移动产生影响。
琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解，温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶，这是它具有多种用途的主要特征和基础。琼脂糖凝胶性能通常用凝胶强度表示。强度越高，凝胶性能越好。质量较好的琼脂糖强度通常在1200克/cm2以上（1%胶浓度）。
琼脂糖的凝胶性是由存在的氢键所致，凡是能破坏氢键的因素都能导致凝胶性的破坏。琼脂糖具有亲水性，并几乎完全不存在带电基团，对敏感的生物大分子极少引起变性和吸附，是理想的惰性载体。在琼脂糖制备过程中需要把琼脂果胶尽量去除，否则琼脂糖有可能存在极微量硫酸根和丙酮酸取代电离基团，就会造成电内渗（EEO），电内渗对质点的移动产生影响。
琼脂糖凝胶电泳Marker条带和样品条带都有问题!!!_问答详情_蚂蚁淘...123
dxy_kk6ecsr82021-08-03
DNA琼脂糖凝胶电泳中,条带的明亮与暗淡是什么造成的? 核酸基因...123
我的葫芦不装酒i2021-07-25
简述琼脂包埋法的过程123
2017-10-02
用琼脂在温度高于50℃时熔化、而低于此温度时则凝固的特性，将其溶于水后与微生物混合，然后冷却凝固或滴入非水相溶液中，从而制成固定化微生物。其特点是包埋微生物活性较高，制作较容易。缺点是氧和底物及产物的扩散受到限制，琼脂凝胶的机械强度较差，且成球受温度影响较大。 以琼脂为载体，建立包埋固定化微生物细胞的方法如下。 方法I ①将琼脂加热溶于水，冷却至45—50℃； ②使琼脂溶液与微生物细胞混合均匀，琼脂的最终浓度为3％； ③将琼脂与微生物细胞的混合液倒入已灭菌的培养皿中，使之冷却凝固； ④将凝胶切成3mm×3mm×3mm的小方块，用生理盐水洗净，备用。 方法Ⅱ ①将琼脂加热溶于水，冷却至45—50℃； ②将琼脂溶液与微生物细胞混合均匀，琼脂的最终浓度为3％； ③在常温条件下(45—50℃)，将琼脂与微生物细胞混合物用针形管滴入上层是液体石蜡、下层是水的量筒中； ④滤出固定化细胞颗粒，用生理盐水洗净，备用。 方法Ⅲ ①将按方法Ⅱ制得的固定化细胞颗粒在下列溶液中浸泡30min； ACAM 7.5％ BIS 0.4％ TEMED 0.5％ VC 2.0％ ②滤出固定化颗粒，加入到0.8％K2S2O4溶液中，在缓速搅拌下放置30min ③滤出固定化颗粒，用生理盐水洗净，备用。
琼脂糖电泳液TAE的配制及琼脂糖电泳123
dxy_fna5oyp02017-08-07
请问各位大神，配制琼脂糖胶的电泳浓度是怎么设定，比如百分之1或百分之1.5的浓度是怎么设置，是1.5g的琼脂糖粉加100g的TAE麽？
请问在做琼脂糖凝胶电泳时要加DNAmarker,怎么判断要加DL2000的...123
dxy_a8m0gib2017-08-07
有谁知道＂琼脂糖的提取方法＂_问答详情_琼脂糖_其他_生化试剂_蚂...123
ymjiang2021-08-05
琼脂糖
1、α-琼脂糖酶及其生产方法
2、磁性琼脂糖复合微球的制备方法
3、高容量大孔琼脂糖凝胶介质的制备方法
4、一种新琼四、六糖的制造方法
5、一种制造新琼八糖、新琼十糖和新琼十二糖的方法
6、油水两相法制备磁性琼脂糖凝胶微球的方法
1、α-琼脂糖酶及其生产方法
2、磁性琼脂糖复合微球的制备方法
3、高容量大孔琼脂糖凝胶介质的制备方法
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5、一种制造新琼八糖、新琼十糖和新琼十二糖的方法
6、油水两相法制备磁性琼脂糖凝胶微球的方法
【PCR产物电泳检测结果点样孔很亮,没有目的条带.是什么原因...123
樱桃儿viiv2021-07-24
手提的斑马鱼RNA再反转录得到CDNA作为模板进行primestar,p的是斑马鱼的全长，但是全长p出来总是带有拖带的情况，有一个情况较好的图是这样的（mark左边的那一条）
我就用这个pcr的产物作为模板又做了一次，结果如下
求大神赐教！！！
(精选)分子生物学实验复习题附答案123
゛初境ゝ1369゜2017-10-02
琼脂糖凝胶电泳时胶中dna发出荧光是因为琼脂糖凝胶中添加了溴化乙锭（EB）。
溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄。
溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄。
什么是琼脂糖,由什么构成？有哪些性质,有什么应用？ 雨露学习互助123
草仓好帅16262017-10-02
什么是琼脂糖，由什么构成
琼脂糖凝胶电泳是常用的分离和检测方法，琼脂是最常用的载体支持物，核酸分子具有电荷效应和分子筛效应，利用此特性可达到分离检测的目的。
一、琼脂糖凝胶的特点
天然琼脂(agar)是一种多聚糖，主要由琼脂糖(agarose，约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下。
1. 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。
2. 琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大(约占98%~99%)，近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。
3. 琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。
4. 电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。
目前，常用琼脂糖作为电泳支持物，分离蛋白质和同工酶。将琼脂糖电泳与免疫化学相结合，发展成免疫电泳技术，能鉴别其他方法不能鉴别的复杂体系，由于建立了超微量技术，0.1ug蛋白质就可检出。
琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA限制性内切核酸酶图谱制作等。由于这种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一。
二、DNA的琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依据它们的相对分子量质量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。
1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系
① DNA分子的大小 在凝胶中，DNA片段迁移距离(迁移率)与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。
② 琼脂脂糖的浓度 如下表所示，不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
表 琼脂糖浓度与DNA分离范围琼脂糖浓度/%0.30.60.70.91.21.52.0线状DNA大小/kb60-520-110-0.87-0.56-0.44-0.23-0.1
2、核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系
不同构型DNA的移动速度次序为：供价闭环DNA(covalently closed circular，cccDNA)>直线DNA>开环的双链环状DNA。当琼脂糖浓度太高时，环状DNA(一般为球形)不能进入胶中，相对迁移率为0(Rm=0)，而同等大小的直线双链DNA(刚性棒状)则可以长轴方向前进(Rm>0)，由此可见，这三种构型的相对迁移率主要取决于凝胶浓度，但同时，也受到电流强度、缓冲液离子强度等的影响。
3、电泳方法
① 凝胶类型
用于分离核酸的琼脂糖凝胶电泳可分为垂直型及水平型(平板型)。水平型电泳时，凝胶板完全浸泡在电极缓冲液下1-2mm，故又称为潜水式。目前更多用的是后者，因为它制胶和加样比较方便，电泳槽简单，易于制作，又可以根据需要制备不同规格的凝胶板，节约凝胶，因而较受欢迎。
② 缓冲液系统
缺少离子时，电流太小，DNA迁移慢;相反，高离子强度的缓冲液由于电流太大会大量产热，严重时，会造成胶熔化和DNA的变性。
常用的电泳缓冲液有EDTA(pH8.0)和Tris-乙酸(TEA)，Tris-硼酸(TBE)或Tris-磷酸(TPE)等，浓度约为50mmol/L(pH7.5~7.8)。电泳缓冲液一般都配制成浓的贮备液，临用时稀释到所需倍数。
TAE缓冲能力较低，后两者有足够高的缓冲能力，因此更常用。TBE浓溶液长期贮存会出现沉淀，为避免此缺点，室温下贮存5×溶液，用时稀释10倍0.5×工作溶液即能提供足够缓冲能力。
③ 凝胶的制备
以稀释的电极缓冲液为溶剂，用沸水浴或微波炉配制一定浓度的溶胶，灌入水平胶框或垂直胶膜，插入梳子，自然冷却。
④ 样品配制与加样
DNA样品用适量Tris-EDTA缓冲液溶解，缓冲液内含有0.25%溴酚蓝或其他指示染料，含有10%-15%蔗糖或5%~10%甘油，以增加其比重，使样品集中。为避免蔗糖或甘油可能使电泳结果产生U形条带，可改用2.5%Ficoll(聚蔗糖)代替蔗糖或甘油。
⑤ 电泳
琼脂糖凝胶分离大分子DNA实验条件的研究结果表明，在低浓度、低电压下，分离效果较好。在低电压条件下，线性DNA分子的电泳迁移率与所用的电压呈正比。但是，在电场强度增加时，较大的DNA片段迁移率的增加相对较小。因此随着电压的增高，电泳分辨率反而下降，为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率，电场强度不宜高于5V/cm。
电泳系统的温度对于DNA在琼脂糖凝胶中的电泳行为没有显著的影响。通常在室温下进行电泳，只有当凝胶浓度低于0.5%时，为增加凝胶硬度，可在4℃进行电泳。
⑥ 染色和拍照
常用荧光染料溴乙锭(EB)染色，在紫外光下观察DNA条带，用紫外分析仪拍照，或用凝胶成像系统输出照片，并进行有关的数据分析。
注意事项：电泳中所使用的染料EB是致癌物质，一定要小心，避免其接触皮肤等，进行电泳操作的时候一定要带手套，手套要及时更换，现在也除了一些EB的替代物，如Goldview等。
琼脂糖凝胶电泳是常用的分离和检测方法，琼脂是最常用的载体支持物，核酸分子具有电荷效应和分子筛效应，利用此特性可达到分离检测的目的。
一、琼脂糖凝胶的特点
天然琼脂(agar)是一种多聚糖，主要由琼脂糖(agarose，约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下。
1. 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。
2. 琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大(约占98%~99%)，近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。
3. 琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。
4. 电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。
目前，常用琼脂糖作为电泳支持物，分离蛋白质和同工酶。将琼脂糖电泳与免疫化学相结合，发展成免疫电泳技术，能鉴别其他方法不能鉴别的复杂体系，由于建立了超微量技术，0.1ug蛋白质就可检出。
琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA限制性内切核酸酶图谱制作等。由于这种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一。
二、DNA的琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依据它们的相对分子量质量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。
1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系
① DNA分子的大小 在凝胶中，DNA片段迁移距离(迁移率)与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。
② 琼脂脂糖的浓度 如下表所示，不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
表 琼脂糖浓度与DNA分离范围琼脂糖浓度/%0.30.60.70.91.21.52.0线状DNA大小/kb60-520-110-0.87-0.56-0.44-0.23-0.1
2、核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系
不同构型DNA的移动速度次序为：供价闭环DNA(covalently closed circular，cccDNA)>直线DNA>开环的双链环状DNA。当琼脂糖浓度太高时，环状DNA(一般为球形)不能进入胶中，相对迁移率为0(Rm=0)，而同等大小的直线双链DNA(刚性棒状)则可以长轴方向前进(Rm>0)，由此可见，这三种构型的相对迁移率主要取决于凝胶浓度，但同时，也受到电流强度、缓冲液离子强度等的影响。
3、电泳方法
① 凝胶类型
用于分离核酸的琼脂糖凝胶电泳可分为垂直型及水平型(平板型)。水平型电泳时，凝胶板完全浸泡在电极缓冲液下1-2mm，故又称为潜水式。目前更多用的是后者，因为它制胶和加样比较方便，电泳槽简单，易于制作，又可以根据需要制备不同规格的凝胶板，节约凝胶，因而较受欢迎。
② 缓冲液系统
缺少离子时，电流太小，DNA迁移慢;相反，高离子强度的缓冲液由于电流太大会大量产热，严重时，会造成胶熔化和DNA的变性。
常用的电泳缓冲液有EDTA(pH8.0)和Tris-乙酸(TEA)，Tris-硼酸(TBE)或Tris-磷酸(TPE)等，浓度约为50mmol/L(pH7.5~7.8)。电泳缓冲液一般都配制成浓的贮备液，临用时稀释到所需倍数。
TAE缓冲能力较低，后两者有足够高的缓冲能力，因此更常用。TBE浓溶液长期贮存会出现沉淀，为避免此缺点，室温下贮存5×溶液，用时稀释10倍0.5×工作溶液即能提供足够缓冲能力。
③ 凝胶的制备
以稀释的电极缓冲液为溶剂，用沸水浴或微波炉配制一定浓度的溶胶，灌入水平胶框或垂直胶膜，插入梳子，自然冷却。
④ 样品配制与加样
DNA样品用适量Tris-EDTA缓冲液溶解，缓冲液内含有0.25%溴酚蓝或其他指示染料，含有10%-15%蔗糖或5%~10%甘油，以增加其比重，使样品集中。为避免蔗糖或甘油可能使电泳结果产生U形条带，可改用2.5%Ficoll(聚蔗糖)代替蔗糖或甘油。
⑤ 电泳
琼脂糖凝胶分离大分子DNA实验条件的研究结果表明，在低浓度、低电压下，分离效果较好。在低电压条件下，线性DNA分子的电泳迁移率与所用的电压呈正比。但是，在电场强度增加时，较大的DNA片段迁移率的增加相对较小。因此随着电压的增高，电泳分辨率反而下降，为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率，电场强度不宜高于5V/cm。
电泳系统的温度对于DNA在琼脂糖凝胶中的电泳行为没有显著的影响。通常在室温下进行电泳，只有当凝胶浓度低于0.5%时，为增加凝胶硬度，可在4℃进行电泳。
⑥ 染色和拍照
常用荧光染料溴乙锭(EB)染色，在紫外光下观察DNA条带，用紫外分析仪拍照，或用凝胶成像系统输出照片，并进行有关的数据分析。
注意事项：电泳中所使用的染料EB是致癌物质，一定要小心，避免其接触皮肤等，进行电泳操作的时候一定要带手套，手套要及时更换，现在也除了一些EB的替代物，如Goldview等。
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