OptimizePCRreactionsthatusedifferentenzymesthantheFailSafe™System(e.g.Taq,Pfu,andTth).
- Fast,simpleoptimization
- ExtremelyhighsensitivityandspecificityusingthePCREnhancerTechnology
- MasterAmpPCRPreMixescontainallcomponentsneededforsuccessfulPCR
- GeneratesPCRproductssuitableforbothTAcloningandblunt-endcloning
- UsefortheoptimizationofPCRreactionsusingavarietyofdifferentenzymesincludingTaq,Pfu,Tth,Tflpolymerases
Applications
Forrapid,dependableoptimizationofPCR,weencourageyoutotrytheFailSafe™PCRSystemtoobtainthebestPCRresultswithanytemplateupto~20kb.However,ifyouprefertouseanotherenzyme,EpicentrealsohastwoMasterAmp™PCROptimizationKitsthatwillhelpyoutoobtainthebestpossIBLePCRresultswiththermostableenzymesfrequentlyusedinPCR,suchasTaq,Pfu,Tth,TflDNApolymerases.TheseMasterAmpPCROptimizationKitscontainaseriesof12MasterAmpPCR2XPreMixesthathavebeenmeticulouslytestedandrepresentacompleterangeofPCRconditionsfrequentlyencountered.EachMasterAmp2XPreMixcontainsallcomponentsneededforPCRexceptfortheprimers,thetemplate,andthePCRenzyme. First,usetheMasterAmp™PCROptimizationKit(Cat.No.MO7201)toperformPCRwithyourtemplate,primers,andeachofthe12MasterAmpPreMixes.SelectthePreMixthatgivesoptimalresults.Then,usethesameMasterAmpPCRPreMixtoobtainreliable,consistentPCRusngthesameDNAtarget/primerset. | STEP1.FindtheoptimalMasterAmpPCRPreMix.DoPCRwithyourtemplate,primersandPCRenzymeinthe12PreMixes. | |
A.A75%-GC-richApoEgeneregionwasamplifiedintotalhumangenomicDNAusingPreMixesA-L.MasterAmpPCRPreMixKproducedoptimalresultsinStep1. | ||
STEP2.UsethesameMasterAmpPCRPreMixtoobtainreliable,consistentPCRofthesamesequence. | ||
B.SubsequentPCRoftheApoEgenewiththesameprimerpairandMasterAmp™PreMixKgaveconsistentresults.SubsequentPCRresultsareconsistentandreliableusingtheoptimalPreMixinStep1. |
MasterAmpPCROptimizationKits;MasterAmpTaqDNAPolymerase;MasterAmpTflDNAPolymerase.Purchaseofthisproductincludesanimmunityfromsuitunderpatentsspecifiedintheproductinserttouseonlytheamountpurchasedforthepurchaser'sowninternalresearch.Nootherpatentrights(suchas5´NucleaseProcesspatentrights)areconveyedexpressly,byimplication,orbyestoppel.FurtherinformationonpurchasinglicensesmaybeobtainedbycontactingtheDirectorofLicensing,AppliedBiosystems,850LincolnCentreDrive,FosterCity,California94404,USA.
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QPCR在实验室中已经非常普及,现在整理一些关于QPCR的相关资料上传,希望对大家有所帮助。
荧光定量PCR技术(FQ-PCR,也称为Real-timePCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
荧光定量PCR技术原理及利用.pdf(1473.28k)
有大神做过人外周血全血miRNA的提取及后续PCR实验的吗?目前课题实验遇到瓶颈,求助大神!!!是否miRNA的PCR验证在全血做不出?必须要用血浆或者血清?目前血浆、血清也有部分样本。。。。有大神指条明路吗?
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物,从而可进行绝对定量或者相对定量。
1.模板提取(一般为RNA):Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop
3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。
还需要反转录用的引物、定量PCR用的一对引物、荧光信号源(荧光染料或荧光标记的探针,看你用什么策略来做定量PCR)
报价要看你需要服务商提供什么服务,如果你只提供实验材料,要求服务商做以上全部工作,只检测一个指标(一个基因的表达水平变化),价格大约每个样品350-500元,多一个指标大约多90元。
一般至少做一组数据两个样品嘛,所以你按1000块一组样品预算吧。
荧光定量PCR数据如下表,想通过GraphPadPrism5软件构建柱状图,但不知道是将2-△△Ct数据导入GraphPadPrism5软件,还是将Mean和SD导入GraphPadPrism5软件中。请大神赐教。另外Mean和SD是求的△△Ct的还是2-△△Ct的?
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