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Ursabioscience/Mellitus Violet 2™
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Ursabioscience/Mellitus Violet 2™
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Ursa BioScience
货号 / 
13
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MellitusViolet2™showsafluorescenceintensityreductionasafunctionofglucoseconcentrationupto100mMglucose,withaglucosepKaof6.85and5.05for100mMFructose.MellitusViolet2™canreADIlybeexcitedat320nm,withanemission≈430nm.

MellitusViolet2™issolddryandissimplyreconstitutedbyaddingwater/MeOH.Onevialofourglucoseprobewilltypicallyallowfor10glucosemeasurementstobeundertaken,whenfurtherdilutedinto3cm3volumeswithinacuvette.50µLofwater/MeOHand/orbufferistypicallyaddedtoeachdryvial.Subsequently,5µLaliquotsdilutedto3cm3,typicallygiveanoptimumODof≈0.25.

Foroptimumperformance,probevialsshouldbestoredat-2to-8Cwhennotbeingused.Probesolutionsshouldbeusedafterdilution.WerecommendtheuseofMellitusVioletC™,thecontrolcompoundforMellitusViolet2™,totestforpossIBLebackgroundinterferences,suchasfromfructose,othersugarsanddiolinterference.

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在紫外-可见-近红外区有特征荧光,并且其 荧光性质(激发和发射波长、 强度、寿命、 偏振等)可随所处环境的性质,如极性、折射率、粘度等改变而灵敏地改变的一类荧光性分子。... 查看更多>
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实时定量的引物设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间。同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了

求各位老师指导一下做荧光定量PCR引物和探针序列怎么设计,做探针的公司哪家性价比比较高,具体是怎么收费的,价格大约多少,谢谢!!!

prR的引物一般是RNA(单链),而探针是已知碱基序列的dna或rna
大学知识即可,不要网上摘的
两者间用的引物有什么区别,可以用一样的序列去设计吗
如果你做的事荧光定量PCR,其引物和一般引物在构成上是没有什么区别的,只是要更加注意引物二聚体、PCR产物大小等问题。染料法不需要其他东西,探针法还需要taqman探针,这个探针的设计是比较有讲究的,并且上面有荧光集团和猝灭基团。具体设计,一般使用相关软件进行。
本人在上海基康合成了一个病毒检测的引物和Taqman探针,第一次合成的引物、探针已经用完了,体系也已经都是优化好的,但用第二批合成的引物、探针时发现问题很多,首先是之前的平台都是在60W的荧光增量,而现在变成了20W,引物、探针还是按照合成单上给的信息溶解的。测了引物、探针的核酸浓度后发现,第二次合成后溶解到10μM的探针和第一次溶解成10μM的探针的核酸浓度差异较大,引物也是如此。我就按照浓度差异,换算成相同的用量进行配制,结果仍然很差,不知道怎么解释。
哪位站友遇到过这类问题,还请给个答案呐!!在此先谢了!
小弟最近在用realtimePCR扩增HPV16病毒(双链环状DNA病毒)的一个片段。引物和探针的设计都是参考文献的。东西设计完后做了几天实验一直不出实验结果,心中焦虑万分,怀疑是引物或是探针设计的问题。求教各位达人,能否帮小弟验证一下设计的引物和探针的合理性。
上游引物:5′-GAATGTGTGTACTGCAAGCA-3′
下游引物:5′-GTTGTATTGCTGTTCTAATGTTGT-3′
Taqman探针:5′-FAM-CAGCATATGGATTCCCATCTC-TAMRA-3′
扩增的产物长度是:195bp(nt188-382)
HPV16全长序列:贴在附件中

磕头跪谢!!!

HPV16.txt(9.91k)
我手上有用于RT-PCR的引物和探针(上海合成的,20bp),做培养细胞成功得到结果。现在做体内实验,不知道是否可以用这个探针来作FISH。
有的老师告诉我用甲醛固定的石蜡切片标本,因为石蜡和甲醛本身会激发荧光,作FISH效果不好,而且不容易成功。
这样的话,
1.是否需要重新设计探针做ISH?
2.检测目的mRNA只需要确定位置和在实验条件下发生的量的改变。使用FISH是否大材小用(本来我是希望能节省费用,用以前的引物探针的)?
PCR技术中扩增的是两引物之间的核苷酸序列,意思是采用该技术,可以大量扩增引物之间的序列,一般情况下,我们需要大量的某一基因的片段时,我们在基因的两端分别设计引物(一段一条),然后在体外,采用PCR的方法,用引物进行体外DNA复制,从而大量合成引物之间的基因。

PCR即聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。

其原理为:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。

但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展。

耐热DNA聚合酶--Taq酶的发现对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链,重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
主要看你的产物大小,如果你的PCR产物在80-250bp之间,且用的是SYBR法或有合适的探针,那还是通用的
在普通探针基础上MGB修饰的探针,它的杂交能力更强,更稳定。