The PI(4,5)P2 Mass ELISA detects the amount PI(4,5)P2 extracted from cells by means of a competitive 96-well ELISA assay.
Assay Range: 250 to 0.016 pmol PI(4,5)P2Sample Type: Dried down lipid extracted from cellsSample Volume: 180 µL/sample, run in triplicate
The PI(4,5)P2 Mass ELISA assay is a competitive ELISA in which the signal is inversely proportional to the amount of PI(4,5)P2 produced.
Once PI(4,5)P2 has been extracted from cell samples, it is incubated with a PI(4,5)P2 detector protein, then added to the PI(4,5)P2-coated microplate for competitive binding. A peroxidase-linked secondary detection reagent and colorimetric substrate is used to detect the PI(4,5)P2 detector protein binding to the plate. The colorimetric signal is inversely proportional to the amount of PI(4,5)P2 extracted from cells.
Product BackgroundPhosphatidylinositol 4,5-bisphosphate, or PI(4,5)P2, is a ubiquitous lipid shown to play a central role in a variety of cell functions including the PKB/Akt pathway leading to cell growth, motility, inflammation, and apoptosis. PI(4,5)P2 is a substrate for class I phosphoinositide 3-kinase (PI3-K) and the product of PTEN phosphatase activity.
Keywords: PI3 Kinase, PI3 K, PIP2, PTEN, Phosphatidylinositol (4,5)-bisphosphate, PtdIns(4,5)P2, PI(4,5)P2, PIP2, Phosphatidylinositol 3-kinase, PI 3-kinase, PI3-Kinase, PI3-K, PI3K, PTEN, Phosphatase and tensin homolog, Phosphatases, cell extraction, lipid extraction, extraction
Categories | Kits & Assays |
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Filter | ELISA, Lipid Detection, Phosphoinositides, PI(4,5)P2 |
美国埃施朗(Echelon)公司在快速发展低碳经济和节约能源的大潮中,以美国埃施朗公司发明的LonWorks控制网络技术为基础的能源管理服务方案被越来越广泛的使用。在世界上有约9000万个内置埃施朗公司的智能网络芯片的终端设备被LonWorks控制网络连接在一起,由智能能源管理控制服务器通过Internet远程监视,控制,诊断和管理,如路灯、电表、执行器、传感器等等。其应用领域涉及楼宇、工厂、交通系统、家庭、公共设施,智能电网,绿色城市等。该能源管理服务方案包括150项专利,已有450多家OEM(原始设备制造商)厂商和90家特许集成商在为该方案提供产品和服务。通过Internet,无论是在办公楼里电梯门的开启和关闭,或者厂房间能源使用数据的采集,埃施朗公司的产品和服务使您在一个网络环境中管理设备。今天,LonWorks控制网络平台已成为全球控制网络技术的公认标准。我们在家庭、列车、半导体制造设备、智能楼宇、加油站、火车制动系统领域的网络系统解决方案,已经被许多世界标准组织采纳作为各自行业的标准,这包括:ISO/IEC对控制网络和楼宇管理规范的国际标准ISO/IEC14908-1,-2,-3和-4、中国控制联网标准GB/Z20177.1,.2,.3和.4、中国商业楼宇和住宅建设的国家标准GB/T20299.4-2006、AAR(美国铁路协会)、ANSI/CEA709.1,.2,.3和ANSI/CEA-852(美国国家标准协会),ASHRAE(美国暖通空调工程师协会),IEEE(电子电气工程师协会),IFSF(美国加油站标准论坛)和SEMI(半导体设备与材料协会)等。埃施朗公司在美国、英国、中国、日本、德国、法国、韩国和荷兰等地设立了办事处,在美洲、亚洲、欧洲各地都有商业伙伴,并为用户提供90多种产品。Echelon公司在NASDAQ股票交易所的交易代码是ELON。埃施朗公司中国代表处于一九九五年底成立,并于2001年初重新组建成埃施朗公司大中华区北京办事处至今,并设立多家代理更好地为广大中国用户提供产品和服务。其间,我们相继成立LonSupport大中华区技术支持中心、大中华区上海联络处、大中华区广州联络处。已经有超过百家中国厂商加入了LonWorks控制网络的OEM行列,从事开发新产品,承接公用事业、工业自动化、楼宇、小区智能化和运输等行业的项目。埃施朗公司将为中国的绿色,低碳,节能,环保的发展进入世界先进水平继续不懈地努力。
EchelonBiosciences成立于1997年10月3日,总部坐落于在美国犹他州。从1997到2004,EBI主要用于政府的补助金以及产品的销售收入来资助其研究工作。2005年初,EBI的依特钠Zentaris购买(NAS:AEZS)的MEP抗感染,PI3激酶小分子程序,目录业务,与科学专业。2007年末,前沿科学公司(FSI)在洛根,犹他州购买了EBI,专业从事卟啉和硼化学。自公司成立以来以来,EBI保留了开发研究试剂脂质新的检测方法。不断开拓**,从而推动药物研究的新发型。
EchelonBiosciences是美国杰出免疫学产品供应商,专业提供各种抗体、分析检测试剂盒、抑制剂等产品,尤其擅长以细胞信号、脂类代谢和标记物研究为主的相关产品。为研究治疗诸如癌症、糖尿病、炎症、感染和心脑血管疾病专家提供**有效工具。
EchelonBiosciences为生命科学社区提供的产品包括:
抗体 分析检测试剂盒
抑制剂 细胞信号产品
脂类代谢 标记物
一笔230万美元的国防部赠款将帮助神经科学家为急诊室和战场开发新的治疗方法。这项研究将集中于开发新的疗法,以帮助保护大脑和其他在创伤、心脏病发作或中风后处于危险中的器官。 罗彻斯特大学医学中心的神经学家MarcHalterman,M.D.,Ph.D该研究的首席研究员说:“虽然我们在中风或心脏骤停后恢复血液流动的能力方面取得了重大进展,但医学界并没有药物来防止这些事件发生后的继发性损害。“这项资助将进一步推进我们对一类既具有抗炎作用又具有细胞保护作用的药物的研究,我们相信这类药物将适用于军事和紧急情况。”该项目是与盐湖城的一个合成抗生素化学家团队合作开发的,该团队由MarkNelson,Ph.D领导,他将担任EchelonBiosciences的副研究员。
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我用Promega公司的双荧光素酶检测试剂盒(E2920)检测到的firefly萤光素酶活性很低,只有4*10的3次方;海肾萤光素酶活性有10的6次方。
我用Ad293细胞做了转染,fireflyluciferase质粒:RanillaLuciferase质粒=0.1ug:0.025ug/一个孔(96孔板),共转染了二天,再进行双萤光素酶检测。
我想了解fireflyluciferase活性用promega的这个E2920-双萤光素酶试剂盒检测得到10的3次方,这种数值正常吗?
我做了3次重复实验,每次firefly萤光素酶活性很低,只有4*10的3次方;而海肾萤光素酶活性有10的6次方。
求指教?fireflyluciferase活性低?会是什么原因呢?
牛胰岛素,是一种多肽
在1965年9月17日我国完成了结晶牛胰岛素的全合成。经过严格鉴定,它的结构、生物活力、物理化学性质、结晶形状都和天然的牛胰岛素完全一样。这是世界上第一个人工合成的蛋白质,为人类认识生命、揭开生命奥秘迈出了可喜的一大步。这项成果获1982年中国自然科学一等奖。
1953年,英国人F. SangerSanger由于测定了牛胰岛素的一级结构而获得1958年诺贝尔化学奖。
1、 配制JC-1染色工作液:
取适量JC-1 Stain (200×),按照每50μl JC-1 Stain (200×)加入8ml ddH2O的比例稀释JC-1,剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1。然后再加入2ml JC-1 Buffer(5×),混匀后即为JC-1染色工作液。6孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ml,其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推。
2、 设置阳性对照:
推荐CCCP(10mM)加入到细胞培养液中处理细胞。随后按照下述方法装载JC-1,进行线粒体膜电位的检测。对于特定的细胞,CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料确定。
3、对于悬浮细胞:
a. 取1~6×105细胞,重悬于0.5ml细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
b. 加入0.5ml JC-1染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间,按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入4ml蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 Buffer(1×),并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后, 4℃ 600g离心3~4min,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
f. 再用JC-1 Buffer(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
4、对于贴壁细胞:
注意:对于贴壁细胞,如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测,应先收集细胞,重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
a.吸除6孔板培养液,根据具体实验如有必要可以用PBS或其它适当溶液洗涤细胞一次,加入1ml细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。
b. 加入1ml JC-1染色工作液,充分混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间,按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 Buffer(1×),并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后, 吸除上清,用JC-1 Buffer(1×)洗涤2次。
e. 加入2ml细胞培养液,培养液中可以含有血清和酚红。
f. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。
5、对于纯化的线粒体:
a. 把配制好的JC-1染色工作液再用JC-1 Buffer(1×)稀释5倍。
b. 0.9ml 5倍稀释的JC-1染色工作液中加入0.1ml总蛋白量为10~100μg纯化的线粒体。
c. 用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测:混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描,激发波长为485nm,发射波长为590nm。如果使用荧光酶标仪,激发波长不能设置为485nm时,可以在475~520nm范围内设置激发波长。另外,也可以参考下面步骤6中的波长设置进行荧光检测。
d. 用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察:方法同下面的步骤6。
6、荧光观测和结果分析:
检测JC-1单体时可以把激发光设置为490nm,发射光设置为530nm;检测JC-1聚合物时,可以把激发光设置为525nm,发射光设置为590nm。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常,细胞的状态也比较正常。
注意事项:
1、 JC-1 Stain(200×)应完全溶解混匀后使用,但应避免反复冻融。必须先把JC-1 Stain(200×)用ddH2O充分溶解混匀后,才可加入JC-1 Buffer(1×)。不可先配制JC-1 Buffer(1×)再加入JC-1 Stain(200×),否则导致JC-1很难充分溶解,严重影响后续的检测。
2、 对于6孔板中的样品,本试剂盒共可以检测100个样品;对于12孔中的样品,本试剂盒共可以检测200个样品。
3、 装载完JC-1后用JC-1 Buffer(1×)洗涤时,尽量使JC-1 Buffer(1×)保持4℃左右,此时的洗涤效果较好。
4、 勿把JC-1 Buffer(5×)全部配制成1×,因为操作过程中需直接使用JC-1 Buffer(5×)。
5、 如JC-1 Buffer(5×)中有沉淀,必须全部溶解后才能使用,为促进溶解可以在37℃加热。
6、 CCCP为线粒体电子传递链抑制剂,有一定毒性,请注意小心防护。
试剂盒在全球市场上的研发与销售呈快速上升趋势,2005年全球市场销售额超过200亿美元,且以15%左右的速度逐年增长.一方面是试剂盒的迅猛发展,而另一方面试剂盒市场良莠不齐的现象愈加明显,试剂盒的生产、销售及认证认可体制尚不完善,没有相应的标准或质量评价政策.且其灵敏度,稳定性及假阴/阳性控制尚不能满足检测需要,采用试剂盒进行检测的公信度受到质疑.
同时,食品安全领域是当前问题最多、最受关注的领域,这个领域的检测包括了物理、化学、微生物及分子生物学基础理论,无论是按检测原理、用途还是其它分类方式,涉及食品安全检测项目的试剂盒的品种是最全最多的.因此,从该领域着手从事评价制度的研究,便于获得基础性数据结果,并由此推广至动植物检疫及其它领域.
随着H7N9禽流感疫情的不断发散,国家流感中心已经多次发放人感染H7N9禽流感检测试剂,覆盖了全国31个流感网络实验室,并表示,诊断试剂的广泛发放是实现关口前移,控制疫情传播、蔓延的重要手段.而一旦H7N9监测关口继续前移,主动监测范围扩大,病毒检测试剂的需求量将进一步加大.
可采用H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR法)和H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法),定价分别为48人份/盒和48反应/盒,相比市场此前预期的100-200元之间的价格定位低了很多.在检验方法上,卫纪委提醒,前者需要配备全自动荧光PCR检测仪专用PCR扩增管和核酸分离试剂盒(硅胶膜吸附法)等必须设备及咽拭子样本,后者卫计委推荐采用达安基因生产的核酸提取试剂盒进行检验.
百奥森18分钟霉菌毒素检测试剂盒,有需要的可以了解下!多种规格型号可供选择
产品名称
黄曲霉毒素B1(AFB1)酶免检测试剂盒
黄曲霉毒素B1(AFB1)酶免检测试剂盒
赭曲霉毒素A(OTA)酶免检测试剂盒
玉米赤霉烯酮(ZEN)酶免检测试剂盒
玉米赤霉烯酮(ZEN)酶免检测试剂盒
呕吐毒素(DON)酶免检测试剂盒
黄曲霉毒素M1(AFM1)酶免检测试剂盒
总黄曲霉毒素(AFT)酶免检测试剂盒
T-2毒素(T-2)酶免检测试剂盒
伏马毒素B1(FB1)酶免检测试剂盒
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