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MCLAB/Poly(A) Polymerase, Yeast/PAPY-50/600,000 units
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MCLAB/Poly(A) Polymerase, Yeast/PAPY-50/600,000 units
品牌 / 
MCLab
货号 / 
PAPY-50
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Poly(A)PolymerasefromYeastworksmoreefficientlythanE.coliPoly(A)PolymeraseforRNAoligonucleotide-labelingandpoly(A)tailing.

Description:
Poly(A)PolymerasecatalyzesthetemplateindependentoftheadditionofAMPfromATPtothe3'-endofRNA.Poly(A)worksmorecompetentlythanE.colipoly(A)polymeraseforRNAoligonucleotide-labelingandpoly(A)tailing.Lessincubationtimeisrequiredfortheyeastenzyme.Thisenzymelabelsbothlongandshortsubstrates.Poly(A)polymerasepreferentiallylabelslongerRNA-moleculeswhereasshortRNA-moleculesarelabeledmoreefficientlybyT4RNAligase.ThereactionrequiresMn2+orMg2+,ATPassubstrates,andanyRNAcontaining3'-hydroxylterminiasprimers.LongerRNAmoleculesaresomewhatbetterprimersthanshortoligomers.Substitutionofcordycepin5'-triphosphate(3'-dATP)forATPresultsintheadditionofasingle3'-dAresiduetotheendsoftheRNA,ausefultechniqueforlabelingRNAatthe3'-end.

Application:
-Labelingthe3'-endsofRNAwithATPorcordycepin
-Poly(A)tailingofRNAforcloningoraffinitypurification
-PreparingaprimingsiteforCDNAsynthesisusingoligo-dT
-EnhancingtranslationofRNAtransferredintoeukaryoticcells

Source:
AnE.colistrainthatcarriestheclonedPoly(A)Polymerasegenefrom(Saccharomycescerevisiae).

SpecificActivity:>20,000U/mg

UnitDefinition:
Oneunitistheamountofenzymewhichincorporates1pmolAMPintoacid-insolublematerialat37°Cin1min.

5xPoly(A)PolymeraseReactionBuffer:
100mMTris-HCl,pH7.0,3.0mMMnCl2,0.1mMEDTA,1mMDTT,500µg/mlAcetylatedBSA,50%Glycerol.

StorageBuffer:
20mMTris-HCl(pH8.0),50mMKCl,0.5mMDTT,50%Glycerol.

AssayConditions:
1xPoly(A)PolymeraseReactionBuffer,1mMrATPand500ng5'-FAMlabeledpolyA20-merRNAina20µlreaction.Afterincubationat37°Cfor10min,acidinsolublerADIoactivityisdeterminedeitherbygelelectrophoresisorwithanautomatedcapillaryDNAsequencer.Inthisassay5unitsofenzymeaddapproximatley60to80adenosinestotheRNAprimer.Intheseconditons20unitsofenzymewilldepletetherATP.

HeatInactivation:65°Cfor20minutes

RecommendedStorageCondition:-20ºC

References:
1.Sippel,A.E.(1973)Eur.J.Biochem.37,31-40.
2.Edmonds,M.(1982)inTheEnzymes,3rdedition,ed.P.D.Boyer(AcademicPress,NewYork)15,217-244.
3.Gething,M.J.,Bye,J.,Skehel,J.andWaterfield,M.(1980)Nature287,301-306.
4.Sano,H.andFeix,G.(1976)Eur.J.Biochem.71,577-583.

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2013 年 12 月,中国报道了首例人感染 H10N8 甲型禽流感病毒死亡病例,患者为一名 73 岁女性,临床诊断为重症肺炎,并伴有高血压、心脏病、重症肌无力等基础性疾病,免疫水平低下,有活禽市场暴露史。患者住院 9 天后因呼吸衰竭、休克死亡,所有密切接触者未出现异常。 从该例患者体内分离出的 H10N8 型禽流感病毒亚型通常见于迁徙性鸟类以及活禽市场,虽然尚未肯定人 查看更多>
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反转录酶M-MLV使用说明(Promega) 1、产品简介莫洛尼鼠白血病病毒反转录酶(M-MLV RT)是一种RNA依赖的DNA聚合酶,能使mRNA(>5kb)转录为cD 查看更多>
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为什么说端粒酶是反转录酶123
你大爷JmIp2018-03-17
为什么说端粒酶是反转录酶
只要是细胞,就得走向衰老,现代研究表明,细胞的衰老和端粒的变短有关系。端粒就是DNA,随着细胞分裂次数的增多,端粒在不断变短,端粒酶就是组织端粒变短的。然而正常细胞中,端粒酶的活性受抑制,端粒酶是怎么染端粒变长的呢?实际上端粒酶是由RNA组成的,可以根据碱基互补配对逆转形成DNA,使得变短的端粒变长。所以说端粒酶可以逆转录形成端粒,使端粒不减短!




各位大侠:小弟最近做个长片段的CDNA与T载体的连接,片段大小6.4K,载体选用的是pUC19和pGEMT-easy,反转录酶用的是RevertAidTirstStrandcDNASynthesisKit(#K1621),CDNA第二链的扩增用的是LATaq。我是用纯病毒的RNA做模板,操作步骤严格按照说明做的,也曾经有一次获得过电泳图清晰显示的是全长6.4KB左右的片段,与载体连接,结果筛选到的几个克隆,插入的片段仅有2KB左右,奈何?可最近几次再用此反转录试剂盒却不能得到所需片段。在此,小弟想问问大家,你们是否遇到同样的问题,是如何解决的?所用的试剂(载体和酶的选择)和方法是什么,可以告诉后来者,共同进步吧。
反转录酶 123
内心很纠结742018-04-03
由它催化转录合成的DNA称为互补DNA(cDNA)。通常情况下,细胞内的转录应由DNA到RNA的,所得RNA为信使RNA(mRNA)供蛋白质合成作模板用。而在部分RNA病毒中,要实现自身扩增,必须具有DNA,因此先由RNA逆转录合成cDNA再由cDNA转录出RNA。逆转录酶可用RT—PCR,将RNA转变为DNA后扩增,以获得RNA的序列。1970年从致癌RNA病毒中发现了反转录酶,并认为此酶与病毒的致癌性质有关。反转录酶也分布于某些正常细胞和胚胎细胞。反转录酶的发现表明不能把生物的遗传信息由DNA→mRNA→蛋白质绝对化,遗传信息也可以从RNA传递到DNA。它促进了分子生物学、生物化学和病毒学的研究,已成为研究这些学科的有力工具。向左转|向右转
如题,我现在有AMV反转录酶,但是我发现DDRTPCR都是用MMLV反转录酶来做的,不知道用AMV可以吗,哪位师兄师姐知道给小弟指点指点,小弟先谢过了。
那你做表达量的时候就不准了啊 不加DNA酶将原有的DNA消化掉,那么你做RT-PCR这个就没意义了 逆转录得到的cDNA和原有的DNA是一样的序列
反转录和逆转录有什么区别? 123
生曰快樂_02482021-08-15
两者是同一生理过程的不同提法,没有本质的区别,都是遗传信息流动的方向是从RNA到DNA。但在一些考题中,它们又有所区别的。反转录是人工条件下,借用逆转录酶,根据逆转录原理,实现用细胞生物mRNA为模板,合成目的基因的过程。目的基因的获得方法中有反转录法,而中心法则的补充时则用逆转录法。就像下面的一道考题,答案就是B。已获得了某种蛋白质的mRNA,通过利用这个mRNA分子获得目的基因,在下列获得目的基因的方法中,哪一种最可取(  ) A、超速离心法   B、反转录法  C、逆转录法   D、鸟枪法cDNA为具有与某RNA链呈互补的碱基序列的单链DNA,即complementary DNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。
此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高[1]。
各位好:
我在做5RACE,选用TaKaRa公司的RNA反转录酶(RNaseH-),不知道这个酶好不好,有什么需要注意的。
LabScan XE Tomato (LSXE) HunterLab123
leyoutianxia142021-08-11
这跟你所用的反转录酶是有关的。按照你所用的反转录酶的说明书来操作。
1. Money 鼠白血病病毒(MMLV)反转录酶:有强的聚合酶活性,RNA酶H活性相对较弱。最适作用温度为37℃。
2. 禽成髓细胞瘤病毒(AMV)反转录酶:有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适作用温度为42℃。
3.Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜热微生物的热稳定性反转录酶:在Mn存在下,允许高温反转录RNA,以消除RNA模板的二级结构。
4.MMLV反转录酶的RNase H突变体:商品名为SuperScript 和SuperScriptⅡ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA,这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的mRNA模板合成较长cDNA。向左转|向右转
好多酶的试剂说明书上都要求反应结束后灭活,如fermentas的MLV就是写着,反应结束后70度10分钟灭活,如果反转完了没有这个灭活,直接放冰箱中储存备用,会怎么样?影响后面PCR的扩增吗?
人体内有没有逆转录酶? 123
具区胜境2010-07-15
最近做了RT-realtimePCR。样品如下:1,阳性对照;2,不加RT酶,加模板;3,不加RT酶和模板,做RT-PCR后,再做realtimePCR(Taqman)。realtime的样品除以上3个RT产物,另加一个无RT产物的对照,共4个样品。结果所有的样品都跑出了CT值……请问可能是什么原因?
品牌问答

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