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竞争法一般用于检测无法同时与两种抗体结合的小分子抗原,其原理为:将针对小分子抗原的抗体包被在酶标板上,检测时加入待测样本,使样本中的待测抗原与酶标板上的抗体结合。然后加入HRP酶标记的抗原,此抗原也可与酶标板上的抗体结合,由于酶标板上固著的抗体数量有限,因此当样本中抗原的量越多,则HRP酶标记抗原可结合的包被抗体就越少,两种抗原竞争结合包被抗体,所以称为竞争法。接着加入HRP酶的底物TMB,TMB被酶催化发生颜色反应,当样本中抗原量越多,代表酶标板孔内留下的HRP标记抗原越少,显色也就越浅。百特纯大分子Meretciel的测激素的ELISA试剂盒有些就是竞争法的。夹心法又叫双抗夹心法,用于检测较大分子的抗原或抗体,又分为:双抗体夹心法,用于检抗原;和双抗原夹心法用于检抗体。以双抗体夹心法为主,下面以双抗体夹心法为例讲解原理(双抗原夹心法类似):首先将具有专一性之抗体包被(coating)于酶标板上,检测时加入待测样本,样本中若含有待测抗原,则会与酶标板上包被的抗体专一性结合,然后加入另一种针对待检抗原的抗体,通常称为检测抗体,包被抗体和检测抗体将抗原夹在中间所以叫双抗夹心。检测抗体通常带有HRP酶标记,接着加入HRP酶的底物TMB,TMB被酶催化发生颜色反应,样本中抗原量越多则显色越深。现在很多ELISA试剂盒生产厂家比如:优尔生和百特纯大分子Meretciel将生物素-亲和素放大系统引入双抗夹心法,也就是在检测抗体上标记生物素,然后加入HRP酶标记的亲和素(或链亲和素),利用亲和素可以和生物素分子紧密结合的特性,将HRP酶连接到检抗上,接着加入底物显色。也有引入二抗的,如下图,检测抗体不标记,再加入HRP标记的二抗与检测抗体结合下图为ELISA原理图,夹心法即Sandwich ELISA,竞争法就是Competitive ELISA向左转|向右转
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