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echelon-inc/PIP3 Mass ELISA/1ea/K-2500s-1ea
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echelon-inc/PIP3 Mass ELISA/1ea/K-2500s-1ea
品牌 / 
Echelon
货号 / 
K-2500s-1ea
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CatalogNo.: K-2500s

Description: Echelon'sPIP3MassELISAdetectstheamountPI(3,4,5)P3(PIP3)extractedfromcellsbymeansofacompetitive96-wellELISAassay.

AssayRange:125to0.04pmolPIP3
SampleType:Drieddownlipidextractedfromcells
SampleVolume:60μL/sample,singlepoint

ProductBackground:TheassayisacompetitiveELISAinwhichthesignalisinverselyproportionaltotheamountofPIP3detected.OncePIP3hasbeenextractedfrommillionsofcellsamples,itisfirstincubatedwithaPIP3detectorprotein,thenaddedtothePIP3-coatedmicroplateforcompetitivebinding.Aperoxidase-linkedsecondarydetectionreagentandcolorimetricsubstrateisusedtodetectthePIP3detectorproteinboundtotheplate.ThecolorimetricsignalisinverselyproportionaltotheamountofPIP3extractedfromcells.
TheproductionofPIP3fromPI(4,5)P2(PIP2)byclassIPI3-kinases(PI3-K)isimportantinmultiplecellsignalingpathways.Typically,experimentstomeasurePI3-Kactivityhaveinvolvedphosphorylationofaphosphoinositidesubstrateusing32P,thenextractionofrADIoactiveproducts,andseparationusingthin-layerchromatography.TheassayplatemethoddevelopedbyEchelonBiosciences,Inc.allowstheusertodeterminePI3-KactivitybymeasuringtheamountofPIP3extractedfromcellsbymeansofstandardELISAformat,eliminatingtheneedforradioactivity,andthinlayerchromatography.

FeaturedinPublications:
1.Ehrmantrout,KimberlyK.,Branch,AngieM.,Neilsen,PaulO.,andThompson,JamesE.."NonradioactiveQuantificationofPhosphoinositide3-Kinase(PI3K)ProductsfromBreastCancerCellLines".AmericanSocietyforCellBIOLOGy(ASCB),Washington,DC.2007.
2.Ehrmantrout,KimberlyK.,Branch,AngieM.,Neilsen,PaulO.."QuantificationofPI3-KinaseProductsfromBreastCancerCellLines".AmericanAssociationforCancerResearch(AACR).Denver,CO.2009.
3.King,JS.,Teo,R.,etal.“TheMoodStABIlizerLithiumSuppressesPIP3SignalinginDictyosteliumandHumanCells.”DiseaseModelsandMechanisms2(5-6):306-12
4.Beneteau,M.,Pizon,M.,etal.“LocalizationogFas/CD95intotheLipidRaftsonDown-ModulationofthePhosphatidylinositol3-KinaseSignalingPathway.”MolCancerRes6(4):604-613
5.Costa,C.,Ebi,H.,etal."MeasurementofPIP3LevelsRevealsanUnexpectedRoleforp110betainEarlyAdaptiveResponsestop110alpha-SpecificInhibitorsinLuminalBreastCancer"Cell27(1):97-108
6.Gross,C.,C.-W.Chang,etal.(2015)."IncreasedExpressionofthePI3KEnhancerPIKEMediatesDeficitsinSynapticPlasticityandBehaviorinFragileXSyndrome."CellReports,DOI:10.1016/j.celrep.2015.03.060
7.S.Choi,etal."AgoNIST-stimulatedphosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphategenerationbyscaffoldedphosphoinositidekinases"NatureCellBiology(2016)18(12),1324-35,doi:10.1038/ncb3441

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PI3Kinase:PI3Kalphaenzyme,active,PI3KInhibitors,andPI3KActivityELISA
ProteinKinasesandPhosphatases

Keywords:Phosphatidylinositol(3,4,5)-trisphosphate,PtdIns(3,4,5)P3,PI(3,4,5)P3,PIP3,Phosphatidylinositol3-kinase,PI3-kinase,PI3-Kinase,PI3-K,PI3K,PI3Kinase,PI3K,cellextraction,lipidextraction

美国埃施朗(Echelon)公司在快速发展低碳经济节约能源的大潮中,以美国埃施朗公司发明的LonWorks控制网络技术为基础的能源管理服务方案被越来越广泛的使用。在世界上有约9000万个内置埃施朗公司的智能网络芯片的终端设备被LonWorks控制网络连接在一起,由智能能源管理控制服务器通过Internet远程监视,控制,诊断和管理,如路灯、电表、执行器、传感器等等。其应用领域涉及楼宇、工厂、交通系统、家庭、公共设施,智能电网,绿色城市等。该能源管理服务方案包括150项专利,已有450多家OEM(原始设备制造商)厂商和90家特许集成商在为该方案提供产品和服务。通过Internet,无论是在办公楼里电梯门的开启和关闭,或者厂房间能源使用数据的采集,埃施朗公司的产品和服务使您在一个网络环境中管理设备。今天,LonWorks控制网络平台已成为全球控制网络技术的公认标准。我们在家庭、列车、半导体制造设备、智能楼宇、加油站、火车制动系统领域的网络系统解决方案,已经被许多世界标准组织采纳作为各自行业的标准,这包括:ISO/IEC对控制网络和楼宇管理规范的国际标准ISO/IEC14908-1,-2,-3和-4、中国控制联网标准GB/Z20177.1,.2,.3和.4、中国商业楼宇和住宅建设的国家标准GB/T20299.4-2006、AAR(美国铁路协会)、ANSI/CEA709.1,.2,.3和ANSI/CEA-852(美国国家标准协会),ASHRAE(美国暖通空调工程师协会),IEEE(电子电气工程师协会),IFSF(美国加油站标准论坛)和SEMI(半导体设备与材料协会)等。埃施朗公司在美国、英国、中国、日本、德国、法国、韩国和荷兰等地设立了办事处,在美洲、亚洲、欧洲各地都有商业伙伴,并为用户提供90多种产品。Echelon公司在NASDAQ股票交易所的交易代码是ELON。埃施朗公司中国代表处于一九九五年底成立,并于2001年初重新组建成埃施朗公司大中华区北京办事处至今,并设立多家代理更好地为广大中国用户提供产品和服务。其间,我们相继成立LonSupport大中华区技术支持中心、大中华区上海联络处、大中华区广州联络处。已经有超过百家中国厂商加入了LonWorks控制网络的OEM行列,从事开发新产品,承接公用事业、工业自动化、楼宇、小区智能化和运输等行业的项目。埃施朗公司将为中国的绿色,低碳,节能,环保的发展进入世界先进水平继续不懈地努力。

EchelonBiosciences成立于1997年10月3日,总部坐落于在美国犹他州。从1997到2004,EBI主要用于政府的补助金以及产品的销售收入来资助其研究工作。2005年初,EBI的依特钠Zentaris购买(NAS:AEZS)的MEP抗感染,PI3激酶小分子程序,目录业务,与科学专业。2007年末,前沿科学公司(FSI)在洛根,犹他州购买了EBI,专业从事卟啉和硼化学。自公司成立以来以来,EBI保留了开发研究试剂脂质新的检测方法。不断开拓**,从而推动药物研究的新发型。


EchelonBiosciences是美国杰出免疫学产品供应商,专业提供各种抗体、分析检测试剂盒、抑制剂等产品,尤其擅长以细胞信号、脂类代谢和标记物研究为主的相关产品。为研究治疗诸如癌症、糖尿病、炎症、感染和心脑血管疾病专家提供**有效工具。


EchelonBiosciences为生命科学社区提供的产品包括:

抗体           分析检测试剂盒

抑制剂          细胞信号产品

脂类代谢         标记物


一笔230万美元的国防部赠款将帮助神经科学家为急诊室和战场开发新的治疗方法。这项研究将集中于开发新的疗法,以帮助保护大脑和其他在创伤、心脏病发作或中风后处于危险中的器官。

罗彻斯特大学医学中心的神经学家MarcHalterman,M.D.,Ph.D该研究的首席研究员说:“虽然我们在中风或心脏骤停后恢复血液流动的能力方面取得了重大进展,但医学界并没有药物来防止这些事件发生后的继发性损害。“这项资助将进一步推进我们对一类既具有抗炎作用又具有细胞保护作用的药物的研究,我们相信这类药物将适用于军事和紧急情况。”该项目是与盐湖城的一个合成抗生素化学家团队合作开发的,该团队由MarkNelson,Ph.D领导,他将担任EchelonBiosciences的副研究员。





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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人Desmin单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的Desmin与单抗结合,加入生物素化的抗人Desmin,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人TM(Thrombomodulin)单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的TM与单抗结合,加入生物素化的抗人TM,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptav 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人b-Defensin单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的b-Defensin与单抗结合,加入生物素化的抗人b-Defensin,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Stre 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人CTX-II单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的CTX-II与单抗结合,加入生物素化的抗人CTX-II,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人nAChR单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的nAChR与单抗结合,加入生物素化的抗人nAChR,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗兔IL-1b单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的IL-1b与单抗结合,加入生物素化的抗兔IL-1b,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人PCIP单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的PCIP与单抗结合,加入生物素化的抗人PCIP,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人TS单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的TS与单抗结合,加入生物素化的抗人TS,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结 查看更多>
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双抗体夹心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
2.次日洗涤3次;
3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;
6.’最后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
本人用一重组蛋白(该蛋白存在于人体的血清中)制备了该蛋白的单克隆抗体多克隆抗体,并且单多克隆抗体都用竞争法证实了可以识别血清中该蛋白的天然形式。
目前,我用该蛋白的鼠源性单抗来包被ELISA板子,5%BSA37度封闭二小时后,洗涤四次后将板子分三个组加入抗原:其中一个组中加入的是我重组的蛋白,另一个组为用其它方法证实含该蛋白的人体内血清,最后一个组加入PBS。37度一小时后洗涤四次后每孔加入我制备的兔源性多抗。37度一小时洗涤六次后我再加入酶标记的抗兔的抗体37度40分钟后洗涤六次后TMB显色。
问题就在我显色后所有的孔都是阳性,其中以抗原为我的重组蛋白组与PBS组OD值最高,两组都可以达到1.8以上,而加入的抗原为人体血清组低,为0.6-1.0不等。
后面我优化条件,封闭液用过5%的脱脂奶粉,2%的BSA,包被的单抗浓度摸了梯度,加入的多抗也摸了梯度,酶标的抗体也摸了梯度。结果都没有改变,连趋势每次都是一样以重组蛋白组与PBS组OD最高。
今天我还试着把抗原换成其它蛋白也做出了强阳性?
请教各位高手,我的ELISA该如何往下面做了啊,是不是我的抗体本身有问题呢?
对了,我包被用的单抗是用GE公司的预装柱纯化的,很纯,在考染中是看不到一条杂带的。
方法一:用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
  1. 包被:用0.05M PH9,碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml,在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。
  2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
  3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml,37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
  4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
  5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
  6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
  方法二:用于检测未知抗体的间接法:
  用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30~60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
请教各位大神:
我现在用商品化的试剂盒进行夹心法ELISA测定某抗体的浓度,盒子给定了4个标准品,标准品抗体浓度为70000~1000单位,测定步骤中要求对样品进行1:1000稀释后测定。
但是有的样本按照1:1000稀释后,最终OD值大于70000浓度的标准品的OD值,然后使用ELISACALC软件进行四参数拟合,超过了标准曲线的范围,就算不出来这个样品的浓度,但是如果在1000-70000之间的OD值就可以算出相应浓度。请教大神们,接下来我是否可以对样品进行1:2000,1:4000浓度稀释,算出结果后再×2、×4,算作此样品的浓度呢?还是直接给一个>70000的定性结果?或者可以有能算出来的其他软件?
Ps试剂盒中提及Dilutionlinearity(稀释线性?)为141%,这个是什么意思呢?
多谢!!

不好意思,新手,好多都不懂,我做的ELISA,空白孔OD值高于部分样本,如果做曲线的话,减去空白孔OD值,算出来样本浓度,有好多负值,所以想问一下,是必须要减去空白孔OD值吗?还是只是在做曲线时标准品减去空白孔OD值,求出方程,直接代入样本OD值(样本不减空白孔),还是都不减空白孔?求大神帮忙?

ELISA有些什么方法?各有啥优缺点?
冲洗不净,残留的酶结合物会分解底物显色,引起本底太高而出现错误
双抗夹心法ELISA标准曲线的问题
大家好,我在做双抗夹心法的elisa实验,已经花了20来天了,然而标准曲线的线性一直做不好,而且不稳定。下面我把具体的实验过程说下,希望大家能给我提个建议,谢谢!
首先我从以下数据中确定了标准品的起始稀释浓度:4.64,46.4,464,4640IU/ml对应的OD为0.55,1.178,1.086,1.168.因此我取46.4IU/ml(300ng/ml)作为标品的起始稀释浓度。然后作了关于单抗,多抗,二抗的合适稀释度的实验,我的数据如下:
123456789
空白0.2290.1920.2120.1540.1390.1730.2360.1770.257
46.4iu/ml1.2421.5271.2691.9641.6281.9592.0051.8802.163
9.28iu/ml0.9680.9501.0131.1360.8731.2461.6971.5861.769
阴性0.1920.1760.2500.1310.1610.1540.1990.2190.244
选取了7号组合单抗,多抗,二抗分别为1ug/ml,1ug/ml,0.5ug/ml。
标品按照以下梯度稀释:46.423.211.65.82.91.450.725iu/ml.以下是我近来做的三组数据,都是相对空白的相对值:

123
46.4iu/ml0.6130.5860.851
23.20.5240.6490.765
11.60.3820.510.663
5.80.3160.3850.567
2.90.2880.3190.37
1.450.2890.1340.303
0.7250.1210.1460.113
空白0.0820.0870.101
阴性0.0820.1050.101
似乎梯度都不明显。我现在疑惑的是我的标品浓度的设置有问题还是之前抗体的浓度选择不合适,请大家多指点,万分感谢!!!
你是想说固相载体的包被物吧,一般双抗体夹心,固相载体包被物是待检抗原相对应的抗体。
ELISA_双抗夹心法检测抗原 123
老虎C3d巍32021-08-04
ELISA双抗夹心法:夹心法常用于检测大分子抗原,一般之操作步骤为:将具有专一性之抗体固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体加入待测检体,检体中若含有待测之抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一之一次抗体,与待测抗原进行键结洗去多余未键结一次抗体,加入带有酵素之二次抗体,与一次抗体键结洗去多余未键结二次抗体,加入酵素受质使酵素呈色,以肉眼或仪器读取呈色结果
手头有P蛋白的鼠单抗和兔多抗,现在想检测培养的肿瘤细胞中P蛋白的含量,用竞争法太浪费抗原了,想用下面的方法(类似夹心法):
包被单抗(过量)——抗原37度1小时——多抗37度1小时——二抗——显色

按道理应该可行,但有一个问题:兔二抗对鼠一抗也会反应吗?
终止液是2mol/L的H2SO4,将酶破坏,蛋白变性,从而改变颜色:由蓝变黄。