求问引物设计的是否合格，以及引物设计的一些疑问？

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2021-07-21

问题描述：

我是小白，不会引物设计，所以是看的网上的一些教程。

教程说去下CDNA序列，下面就是cDNA的序列。

问题一：看教程里，他选取了有蓝色也有黑色的区域，所以我觉得是不是绿色标记的引物更好一些，但是师姐说前向引物应该在蓝色，逆向引物在黑色区域，那么这三个是不是都不行了？

问题二：都是cDNA序列了，为啥还一定要包含蓝色又包含黑色？蓝色和黑色有什么区别？请问下意义是啥？

问题三：如果不需要既包含蓝色又包含黑色，那么是不是前后引物在蓝色里也可以？

希望大家能给我一些指导，给出我一些好的建议，不甚感激！

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